Transkriptase balik, juga dikenal sebagai DNA polimerase yang bergantung pada RNA, adalah enzim DNA polimerase yang mentranskripsi RNA untai tunggal menjadi DNA. Kinerja transkriptase balik akan secara langsung memengaruhi kinerja akhir reagen diagnostik molekuler. Sebagai respons terhadap kendala produsen reagen diagnostik molekuler, Yeasen Telah melakukan transformasi arah pada reverse transcriptase. Reverse transcriptase memiliki kinerja yang sangat baik dan diterima dengan baik oleh pelanggan!

1. Apa fungsi enzim transkriptase balik?
2. Bagaimana cara memilih reverse transcriptase?
3. Mengapa memilih Yeasentranskriptase balik?
4. Produk terkait dan kinerja
5. Produk terkait

1. Apa fungsi enzim transkriptase balik?

Transkriptase balik adalah DNA polimerase yang bergantung pada RNA. Ia dapat mentranskripsi RNA cetakan dan membentuk DNA komplementer (cDNA). cDNA untai tunggal diubah menjadi DNA untai ganda menggunakan DNA polimerase. Jadi, transkriptase balik umumnya digunakan untuk mengukur tingkat sintesis mRNA saat dikombinasikan dengan teknik reaksi berantai polimerase, yang disebut RT-PCR. Uji RT-PCR kuantitatif umumnya digunakan dalam diagnosis penyakit. Oleh karena itu, transkriptase balik memainkan peran penting dalam penelitian ilmiah dan aplikasi praktis.

2. Bagaimana cara memilih reverse transcriptase?

Transkriptase balik yang umum adalah M-MLV dan AMV, di antaranya M-MLV lebih baik daripada AMV. Namun, enzim RT konvensional memiliki dua situs aktif, satu menjalankan aktivitas polimerase dan yang lainnya menjalankan aktivitas ribonuklease H. RNase H adalah endonuklease yang mampu mendegradasi bagian RNA dari hibrida DNA–RNA, famili. Oleh karena itu, transkriptase balik yang tidak memiliki aktivitas RNase H bermanfaat untuk sintesis cDNA. Selain itu, penggunaan RT versi termostabil bermanfaat untuk menurunkan amplifikasi asam nukleat nonspesifik dan meminimalkan dampak struktur sekunder yang kompleks.

3. Mengapa memilih Yeasentranskriptase balik?

Yeasen telah melakukan modifikasi terarah pada reverse transcriptase, yang menghilangkan aktivitas RNase H, sehingga meningkatkan kemampuan sintesis cDNA. Menggunakan teknologi evolusi protein untuk meningkatkan termostabilitas reverse transcription.

YeasenEnzim reverse transcriptase tidak hanya memiliki kemampuan sintesis yang kuat tetapi juga kemampuan toleransi yang kuat. Selain itu, Yeasen memiliki persyaratan kualitas yang ketat. Ini adalah pilihan terbaik untuk reverse transcriptase.

4. Produk terkait dan kinerja

4.1 Tahan terhadap suhu tinggi 65°C

Menggunakan 500ng total RNA sel 293T sebagai cetakan, transkripsi balik dilakukan pada suhu 42°C-65°C menggunakan Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase. Ambil 1 μL cDNA sebagai cetakan untuk mengamplifikasi gen TFRC (4,4kb).

Gambar 1. Lakukan transkripsi balik pada suhu 42°C-65℃

4.2 Kompatibel dengan template yang kompleks

Suhu reaksi 55°C dapat memenuhi transkripsi balik templat konvensional dan templat struktur sekunder, dan suhu reaksi templat GC tinggi dapat ditingkatkan secara tepat hingga 65°C.

Gambar 2.Cocok untuk template kaya GC dan template struktur sekunder

4.3 Kinerja ekstensi yang sangat baik

Menggunakan 500ng total RNA dari sel 293T sebagai cetakan dan Oligo(dT) sebagai primer, cDNA disintesis menggunakan Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase. Ambil 1 μL cDNA sebagai cetakan untuk mengamplifikasi 500bp dari 5' gen DY1C1N1 (19,9kb). Hasil penelitian menunjukkan bahwa Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase dapat mensintesis cDNA hingga 19,8kb.

Gambar 3. Hingga 19,8kb cDNA dapat disintesis

4.4 Sintesis cepat

Dengan menggunakan RNA sel 293T sebagai cetakan, transkripsi balik dilakukan sesuai dengan prosedur standar dalam manual, dan waktu transkripsi balik ditetapkan masing-masing selama 5, 10, 15, 30, 45, dan 60 menit. Hifair™ III Reverse Transcriptase dapat mensintesis cDNA 6kb dalam waktu 5 menit, dan spesifisitas serta hasilnya lebih unggul daripada merek V.

Gambar 4. cDNA 6kb dapat disintesis dalam waktu 5 menit

4.5 Jangkauan linier lebar

Menggunakan 5pg-5μg total RNA dari sel 293T sebagai cetakan, cDNA disintesis menggunakan Hifair™ III Reverse Transcriptase. 1 μL cDNA digunakan sebagai cetakan, dan qPCR dilakukan pada keempat gen, dan hasilnya menunjukkan bahwa efisiensi amplifikasi semuanya antara 98% dan 100,10%. Hal ini menunjukkan bahwa cDNA dapat disintesis secara efisien dalam rentang linier yang luas dari cetakan.

Gambar 5. cDNA dapat disintesis secara efisien dalam rentang templat yang luas

4.6 Kontrol kualitas yang ketat

Untuk memastikan kinerja yang stabil Yeasenenzim terbalik, Yeasen menerapkan persyaratan secara ketat dalam proses produksi untuk menstabilkan proses produksi dan memastikan stabilitas batch. Pada saat yang sama, pemeriksaan kualitas diperkuat untuk mendeteksi residu termasuk eksonuklease, nickase, RNase, dll., untuk Pastikan tidak ada residu, agar tidak mempengaruhi percobaan hilir.

Gambar 6. Deteksi residu

5. Produk terkait

Produk yang disediakan oleh Yeasen adalah sebagai berikut.

Tabel 1. Produk Terkait

Mengenai Membaca

Pedoman Seleksi Transkriptase Terbalik

Yeasen UDG: "Ahli anti-fouling" dalam reaksi PCR