Dengan pesatnya perkembangan Proti SDalam bidang sains, teknologi pemurnian protein memiliki peran yang semakin penting dalam bidang penelitian biologi dan industri bioteknologi. Sebagai teknik inti, teknologi ini melibatkan integrasi informasi pengkodean protein target ke dalam sel inang melalui metode rekayasa genetika, sehingga sel inang dapat diinduksi untuk memproduksi protein yang dibutuhkan secara efisien. Selanjutnya, serangkaian langkah operasi in vitro yang canggih dilakukan untuk mencapai ekstraksi protein dengan kemurnian tinggi. Pemurnian protein memungkinkan para ilmuwan untuk mengisolasi jenis protein tunggal, yang sangat penting untuk studi mendalam tentang struktur dan fungsi protein, pengembangan obat baru, diagnosis penyakit, dan promosi penerapan bioteknologi. Teknologi ini tidak hanya memastikan keakuratan eksperimen ilmiah tetapi juga terus mendorong pengembangan ilmu hayati.
Gambar 1. Diagram skema kromatografi afinitas[1]
Dalam bidang rekayasa protein, tag fusi berfungsi sebagai alat yang ampuh, yang dapat memfasilitasi berbagai tujuan eksperimen dengan mengikat protein target. Fungsi tag fusi umum tercantum dalam tabel di bawah ini sebagai referensi. Namun, setelah tag ini tetap berada pada protein fusi setelah menjalankan fungsi tambahan awalnya, tag ini dapat menimbulkan efek buruk pada eksperimen berikutnya, seperti mengganggu eksperimen imunologi hewan atau memengaruhi aktivitas biologis protein. Oleh karena itu, sangat penting untuk membuang tag fusi yang tidak diperlukan ini guna memastikan fungsi normal protein dan keakuratan eksperimen.
Tabel 1. Pengenalan Fungsi Tag Fusi Umum dan Metode Pembelahan Enzim
| Tag fusi | Ukuran (KDA) | Fungsi | Metode pembelahan enzimatik umum |
| Miliknya | 0.84 | Bermanfaat untuk pemurnian, mampu memurnikan protein tubuh yang larut/inklusi. | Protease TEV |
| Bendera | 1.01 | Tujuan protein menyatu dengan Fketinggalan tag dapat dikenali oleh antibodi terhadap Fketinggalan, sehingga protein fusi yang mengandung Fketinggalan Tag dapat dideteksi dan diidentifikasi melalui Western Blot, ELISA, dan metode lainnya. | Enzim Enterokinase |
| PPN | 26 | Meningkatkan kelarutan protein, hanya mampu memurnikan protein yang larut dan melindungi protein beracun. | Trombin |
| MBP | 44.4 | Meningkatkan kelarutan protein dan melindungi protein beracun. | Protease TEV |
| Bahasa Indonesia: NusA | 55 | Meningkatkan kelarutan protein dan melindungi protein beracun. | Trombin |
| SUMO | 11.2 | Meningkatkan kelarutan protein, meningkatkan protein dari proteolitik hidrolisis, dan meningkatkan stabilitas protein. | Protease SUMO |
Hari ini, kami dengan senang hati memperkenalkan kepada Anda produk canggih untuk menghilangkan tag fusi secara efisien dan tepat - UCF.MEWaktu Standar Protease rTEV. Dengan prosedur eksperimennya yang sederhana dan mudah dioperasikan, enzim ini dapat dengan mudah membelah tag yang tidak diperlukan dari protein fusi, sehingga memperoleh protein target dengan kemurnian tinggi.
UCF.MEWaktu Standar rTEV Protease
TEV Protease merupakan protease yang banyak digunakan untuk pembelahan tag fusi protein rekombinan, yang dikenal karena spesifisitas situsnya yang tinggi. Enzim ini secara ketat mengenali urutan tujuh asam amino EXXYXQ↓(G/S) dan melakukan pembelahan yang tepat antara glutamin dan glisin atau serin. Urutan tujuh asam amino yang paling umum adalah Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly. Spesifisitas ini memastikan keakuratan dan efisiensi dalam prosedur pemrosesan protein.
Gambar 2. Diagram skema mekanisme kerja protease TEV[2]
UCF.MEWaktu Standar rTEV Protease merupakan protease rekombinan yang telah direkayasa secara genetik dan dimurnikan secara halus. Protease ini tidak hanya mempertahankan aktivitas fungsional penuh dari enzim TEV alami tetapi juga menunjukkan stabilitas dan spesifisitas yang sangat baik pada rentang suhu yang lebih luas. Itu residu gDNA inang dari tProduknya adalah sangat rendah, memastikan efisiensi pemotongan yang lebih tinggi dari tag fusi protein dalam aplikasi praktis dan secara efektif mengurangi risiko masuknya residu zat eksogen. UCF.MEWaktu Standar Protease rTEV menunjukkan aktivitas optimal pada kondisi pH 7,0 dan 30°C. Namun, ia mempertahankan aktivitas bahkan pada berbagai kondisi dengan pH 6,0-8,5 dan suhu 4-30°C, untuk memenuhi berbagai persyaratan pemrosesan protein. Perlu disebutkan bahwa UCF.MEWaktu Standar Protease rTEV memiliki tag 6×His di N-terminusnya, yang dapat dihilangkan secara efisien oleh resin Ni-NTA, sehingga mencapai pemurnian protein target yang tepat.
Tampilan kinerja
1. Efisiensi pembelahan tinggi: Tag protein dibelah lebih menyeluruh
Menggunakan protein fusi (3 μg) yang mengandung UCF.MEWaktu Standar Situs pembelahan protease rTEV sebagai substrat, UCF.MEWaktu Standar Protease rTEV pada 10, 5, dan 3 U ditambahkan masing-masing, dan reaksi dilakukan pada suhu 30°C selama 1 jam. Efek pembelahan dideteksi dengan elektroforesis gel agarosa. Hasil penelitian menunjukkan bahwa Ysantai sajaUCF.ME milikWaktu Standar Protease rTEV dapat membelah substrat secara efisien ketika jumlah masukan lebih dari 3 U, dengan efisiensi pembelahan >90%.
Gambar 3. Verifikasi aktivitas pembelahan UCF.MEWaktu Standar rTEV Protease
2. Residu gDNA host rendah: Secara efektif mengurangi risiko masuknya residu zat eksogen
Dengan menguji host (Bakteri E.coli) residu gDNA dalam berbagai batch UCF.MEWaktu Standar rTEV Protease, hasil penelitian menunjukkan bahwa residu gDNA host UCF.MEWaktu Standar Protease rTEV jauh di bawah <1 salinan/U.
Gambar 4. Hasil residu gDNA host di UCF.MEWaktu Standar rTEV Protease
3. Kondisi aplikasi yang luas: Mampu memenuhi berbagai persyaratan pemrosesan protein.
Dengan memverifikasi aktivitas pembelahan UCF.MEWaktu Standar rTEV Protease dalam kondisi yang berbeda, hasilnya menunjukkan bahwa UCF.MEWaktu Standar Protease rTEV memiliki aktivitas yang kuat dalam kondisi 4-30°C, yang dapat memenuhi berbagai persyaratan aplikasi pelanggan.
| Waktu reaksi (H) | Aktivitas pembelahan pada suhu yang berbeda (%) | |||
| 4℃ | 16℃ | 21℃ | 30℃ | |
| 1 | 34 | 58 | 56 | 85 |
| 2 | 58 | 80 | 78 | 90 |
| 3 | 71 | 99 | 99 | 99 |
| 3.5 | 84 | 99 | 99 | 99 |
kamusantai sajaproduk pemotongan protein tag fusi yang direkomendasikan
| Produk Nama | Produk Nbanyak | |
| TEV Protease | UCF.MEWaktu Standar rTEV Protease | tahun 20427Bahasa Inggris |
| Enzim Enterokinase | Enterokinase, Rekombinan | 20395ES |
| Protease SUMO | Protease SUMO | 20410ES |
| 3C Protease | 3C Protease | 20409ES |
Referensi：
[1] Parikh I, Cuatrecasas P. Kromatografi Afinitas[J].Vox Sanguinis, 1972, 23(1-2):141-146.DOI:10.1159/000466530.
[2] Paththamperuma C, Page R C. Uji fluoresensi dequenching untuk aktivitas protease TEV[J]. Biokimia analitik, 2022, 659: 114954.