Kontaminasi Aerosol di Lingkungan Operasional sebagai Penyebab Paling Umum Positif Palsu pada Hasil PCR: Penemuan Perintis Uracil DNA Glycosylase (UDG) oleh Ilmuwan Amerika Lindahl dalam E. coli dan Bacillus subtilis, dan Pembentukan Sistem Pencegahan Kontaminasi PCR melalui Penggunaan Enzim UDG dengan dUTP.

Enzim UDG yang tersedia secara komersial terutama terdiri dari dua jenis: enzim UDG biasa yang berasal dari Escherichia coli dan Bacillus subtilis, dan enzim UDG termolabil yang bersumber dari bakteri laut psikrofilik. Enzim UDG biasa menunjukkan ketahanan panas yang lebih besar, mempertahankan sejumlah kecil aktivitas urasil-DNA glikosidase bahkan setelah perlakuan pada 95 ° C selama 10 menit, yang dapat menyebabkan degradasi produk amplifikasi target yang mengandung dU. Selain itu, karena penggunaan galur bakteri yang direkayasa (seperti E. coli) untuk ekspresi rekombinan enzim molekuler, ada sejumlah DNA genom inang yang tersisa dalam enzim ini. Ditambah dengan pengaruh lingkungan manufaktur dan sumber manusia, produk enzim molekuler sangat rentan terhadap kontaminasi DNA. Selama deteksi patogen, DNA yang terkontaminasi dapat menutupi asam nukleat target yang jumlahnya sedikit atau terdeteksi bersama mereka, sehingga memengaruhi interpretasi hasil.

Yeasen UCF.ME Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), tahan panas

Keterangan

Uracil DNA Glikosilase UCF.ME (UDG/UNG), tidak tahan panas, 1 U/μL (Cat#14466ES) berasal dari bakteri laut psikrofilik, enzim UDG yang sangat rendah residunya dan tidak tahan panas ini dikenal sebagai UCF.ME. Penggunaan produk ini dapat mencegah aktivitas residu enzim UDG konvensional setelah inaktivasi dari degradasi produk amplifikasi yang mengandung dU pada suhu ruangan. Produk ini juga mencegah bakteri latar belakang yang ada dalam enzim molekuler menyebabkan hasil positif palsu dalam hasil PCR. Oleh karena itu, pengenalan enzim UDG yang sangat rendah residunya dan tidak tahan panas UCF.ME® sangat penting untuk mengidentifikasi patogen infeksius secara akurat dan membantu diagnosis klinis infeksi dan penyakit infeksius.

Keunggulan produk

• Residu DNA genomik UCF.ME yang sangat rendah—E. coli <0,1 salinan/U;
• Residu nuklease rendah—Tidak ada eksonuklease, enzim pencatat, atau RNase yang tersisa;
• Kemampuan pencernaan yang kuat—0,05 U/T dapat mencerna 105 salinan/T produk dU-DNA;
• Termolabilitas yang baik—Inaktivasi lengkap dalam kondisi apa pun 50°C selama 10 menit, 55°C selama 5 menit, atau 95°C selama 5 menit;
• Kompatibel dengan sistem reaksi RT-qPCR—Tidak ada dampak pada sistem deteksi bahkan pada tingkat input tinggi (sistem reaksi 2U/20μL).

(1) Kemurnian Protein ≥ 95%