GMP RNase R ： Buka kunci momentum baru dalam penelitian RNA melingkar!

RNA melingkar (circRNA) merupakan kelas unik dari molekul RNA non-coding. RNA ini terbentuk melalui mekanisme yang disebut back splicing. Dua ekson dari prekursor mRNA dihubungkan ke dalam struktur loop tertutup selama penyambungan. Hal ini menghindari struktur tutup 5' dan ekor 3' yang umum ditemukan pada molekul RNA linear. Struktur melingkar ini memberikan stabilitas tinggi pada circRNA, membuatnya kurang rentan terhadap degradasi oleh nuklease di dalam sel. Oleh karena itu, mereka memiliki waktu paruh yang lebih lama dalam sel, yang memungkinkan mereka untuk mencapai efek dosis rendah dan tahan lama dalam aplikasi praktis. Selain itu, circRNA memiliki keuntungan dari proses produksi yang relatif sederhana karena tidak memerlukan itu nukleotida yang dimodifikasi pembatasan atau poliadenilasi, menjadikan RNA sirkuler sebagai titik fokus dalam pengembangan obat.

Ini memiliki keuntungan yang signifikan dalam pengembangan obat, yang rinciannya terutama terdaftar dalam hal berikut:

01 Stabilitas lebih tinggi

Struktur circRNA membuatnya tahan terhadap degradasi oleh nuklease, sehingga obat ini memiliki waktu paruh yang lebih panjang dan stabilitas yang lebih tinggi dalam sel, yang sangat penting untuk efek obat yang berkelanjutan.

tanggal 02 Imunogenisitas rendah

Dibandingkan dengan RNA linier, circRNA memiliki imunogenisitas yang lebih rendah, yang mengurangi kemungkinan terjadinya reaksi imun, membuat circRNA lebih cocok sebagai pembawa obat.

tanggal 03 Ekspresi protein yang efisien

Penelitian menunjukkan bahwa circRNA yang direkayasa dapat mengekspresikan protein secara stabil dan efisien dalam sel eukariotik, yang sangat penting untuk terapi penggantian protein.

tanggal 04 Aplikasi potensial pengobatan penyakit

circRNA telah menunjukkan potensi dalam pengobatan berbagai penyakit, termasuk penyakit langka, terapi kanker, dan sebagai bagian dari pengembangan vaksin.

tanggal 05 Sistem pengiriman yang inovatif

Sistem pengiriman yang baru dikembangkan, seperti nanopartikel lipid (LNP), dapat secara efektif mengirimkan circRNA ke sel target, yang sangat penting untuk penargetan dan kemanjuran obat.

tanggal 06 Pengembangan vaksin

Vaksin circRNA telah menunjukkan potensi dalam pengembangan vaksin COVID-19, yang mampu mendorong produksi lebih banyak antibodi penetral dan respons sel T yang efektif, serta lebih stabil pada suhu kamar dibandingkan dengan mRNA linier, yang membantu menyederhanakan kondisi penyimpanan dan transportasi.

tanggal 07 Pengeditan gen

circRNA juga menunjukkan potensi di bidang penyuntingan gen, yang mampu berfungsi sebagai cetakan untuk sistem penyuntingan gen, menyediakan ekspresi protein yang lebih persisten dan stabil.

Proses produksi circRNA meliputi: persiapan templat, transkripsi in vitro, penghapusan templat DNA, sirkularisasi, dan pemurnian. Setelah sirkularisasi RNA, RNA yang tidak disirkularisasi perlu dicerna dengan Ribonuclease R (RNase R) untuk memperkaya circRNA.

Yeasen memiliki desain rasional enzim molekuler dua arah dan platform evolusi terarah, serta basis produksi enzim molekuler yang dirancang khusus untuk produk tingkat GMP. Mengembangkan dan memproduksi produk RNase R bermutu GMP dengan kemurnian tinggi dan aktivitas pencernaan yang kuat, memberikan dukungan untuk peluncuran vaksin/obat RNA baru.

Gambar 1: Diagram proses produksi RNA sirkuler

(Sumber: Front Immunol 2023 Jan 12:13:1091797. doi: 10.3389/fimmu.2022.1091797. eCollection 2022.)

RNase R (Ribonuclease R, RNase R) adalah eksoribonuklease 3'→5' yang bergantung pada Mg2+ yang berasal dari Bakteri Escherichia coliIa dapat mencerna semua RNA linier dan mengalami kesulitan mencerna circRNA, Lasso RNA, atau molekul RNA untai ganda dengan kurang dari 7 nukleotida yang menonjol di ujung 3'. RNase R umumnya digunakan untuk menghilangkan molekul RNA linier, mencapai tujuan pengayaan RNA non-linier seperti circRNA dan lariat RNA.

Aplikasi utama daerah adalah:

  • Penelitian ekspresi gen;
  • Penelitian tentang penyambungan alternatif;
  • Memperkaya circRNA dari sampel biologis;
  • Identifikasi struktur lariat intronik RNA;
  • Identifikasi ekson circRNA.

Fitur Produk

  • Kemurnian protein (SDS-PAGE) ≥95%;
  • Tidak ada residu eksonuklease;
  • Dibandingkan dengan pesaingnya, produk ini memiliki kemampuan setara dalam mencerna RNA linier;
  • Dibandingkan dengan pesaingnya, produk ini memiliki efek serupa pada pengayaan circRNA.

Demonstrasi kinerja

Kemurnian protein (SDS-PAGE) ≥95%

Gambar 2: Uji Kemurnian Protein: Dari kiri ke kanan, hasilnya adalah untuk volume yang berbeda (1 μL, 2 μL, 3 μL) dari konsentrasi produk yang sama. Hasilnya menunjukkan bahwa kemurnian protein Yeasen Produk RNase R ≥95%.

Tidak ada residu eksonuklease

Gambar 3: Deteksi Residu Eksonuklease: tambahkan 20 U Yeasen RNase R pada 0,5 μg λDNA-Hind III digest, inkubasi pada suhu 37°C selama 4 jam, kemudian lakukan elektroforesis gel agarosa. Hasil menunjukkan bahwa pita DNA tidak berubah, yang menunjukkan tidak ada eksonuklease yang tersisa di dalam Yeasen Produk RNase R.

Dapat dibandingkan dengan produk RNase R merek impor A dalam mencerna RNA linier

Gambar 4: Perbandingan kemampuan Yeasen Produk RNase R dan produk RNase R dari produsen impor untuk mencerna RNA linier:Ketika Yeasen Produk RNase R dan produk RNase R dari produsen impor A ditambahkan ke sistem reaksi yang mengandung substrat RNA linier, hasilnya menunjukkan bahwa ketika jumlah produk RNase R yang ditambahkan mencapai 2-4 U, pita RNA menjadi lemah atau bahkan menghilang, yang menunjukkan bahwa RNase R memiliki efek pencernaan pada molekul RNA linier. Selain itu, kapasitas pencernaan Yeasen Produk RNase R dan produk RNase R dari produsen impor A pada molekul RNA linear sebanding.

Setara dengan efek pengayaan circRNA dari produk RNase R merek impor A

Gambar 5: Perbandingan efek pengayaan circRNA dengan Yeasen Produk RNase R dan produk RNase R dari produsen impor A: Sistem reaksi yang mengandung substrat circRNA mengalami reaksi dengan Yeasen produk dan produk RNase R dari produsen impor A. Hasil penelitian menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan pada kecerahan pita RNA setelah perlakuan dengan YeasenProduk RNase R dan produk RNase R dari produsen impor A, menunjukkan bahwa circRNA dapat menahan pencernaan oleh RNase R. Hasil di atas menegaskan bahwa kedua Yeasen produk dan produk RNase R dari produsen impor dapat digunakan secara efektif untuk pengayaan circRNA.

Umpan balik pelanggan

kamuMUDAH RNase R memiliki efek pembelahan yang lebih baik pada RNA linier dibandingkan dengan merek lain.

Gambar 6: Perbandingan efek pencernaan RNase R pada molekul mRNA linier antara Yeasen produk dan produsen A dan B:Reaksi dilakukan dengan menambahkan Yeasen Produk RNase R dan produk RNase R dari produsen A dan B ke sistem reaksi yang mengandung 1 μg substrat mRNA linier. Hasil penelitian menunjukkan bahwa Yeasen Produk RNase R memiliki efisiensi pencernaan yang lebih baik pada RNA linier dibandingkan dengan produk RNase R dari produsen A dan B.

Informasi Produk

Nama Produk

Kode Produk

Spesifikasi Produk

RNase R kelas GMP (20 U/μL)

14615ES

500U/5000U/20KU/200KU

10×RNase R Reaction Buffer Kelas GMP

14616ES

500µl/1ml/5ml/10ml/100ml

Referensi

1.Qu L, Yi Z, Shen Y, dkk. Vaksin RNA sirkular terhadap SARS-CoV-2 dan varian yang muncul. Sel. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044

2. Chen L, Wang C, Sun H, dkk. Kotak peralatan bioinformatika untuk penemuan dan analisis circRNA. Ringkasan Bioinform. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001

Pertanyaan