Dengan pesatnya perkembangan bioteknologi, terapi mRNA, sebagai metode pengobatan yang baru muncul, telah menarik banyak perhatian karena kemampuan pemrogramannya yang kuat dan kecepatan responsnya yang cepat. Dalam bidang vaksin mRNA dan terapi gen, sintesis mRNA berkualitas tinggi secara efisien merupakan langkah kunci dalam mencapai tujuan terapeutik. Selama proses ini, T7 RNA polimerase (T7 RNAP) memainkan peran penting, yang dapat secara efisien mengkatalisis sintesis mRNA secara in vitro.
Meskipun T7 RNAP memainkan peran penting dalam sintesis mRNA, dalam praktiknya, ia sering kali menghasilkan RNA untai ganda (dsRNA) sebagai produk sampingan. dsRNA merupakan salah satu ciri khas banyak virus, dan karenanya mudah dikenali oleh protein pengikat dsRNA intraseluler, yang memicu respons imun bawaan dan reaksi inflamasi. Ini berarti bahwa jika formulasi mRNA mengandung kadar dsRNA yang lebih tinggi, hal itu dapat menyebabkan aktivasi imun yang tidak perlu, yang dapat memengaruhi kemanjuran terapi atau menyebabkan efek samping yang serius. dsRNA yang berlebihan juga dapat mengganggu fungsi normal mRNA, termasuk efisiensi translasi dan stabilitas mRNA, yang secara tidak langsung memengaruhi efektivitas terapi mRNA.
Gambar 1: Dampak produk sampingan dsRNA dan reaksi T7 RNAP yang dioptimalkan.
Oleh karena itu, pengembangan dan penerapan metode yang efektif untuk mengurangi pembentukan dsRNA merupakan bagian penting dari pengembangan teknologi mRNA. Para peneliti telah mengembangkan berbagai strategi, termasuk penggunaan polimerase RNA T7 yang lebih baik, modifikasi nukleotida, optimalisasi penyangga transkripsi IVT, dan proses pemurnian hilir.
Data Produk
Hasil: lebih dari 9 mg/mL
Kandungan dsRNA: kandungan dsRNA telah berkurang secara signifikan setidaknya 10 kali lipat
Efisiensi Pembatasan: lebih dari 99%
Polimerase RNA T7 dsRNA Rendah Proses Penyaringan:
1) pembangunan perpustakaan acak dan metode penyaringan throughput tinggi FADS, perpustakaan mutasi acak lebih dari 10^6 telah disaring.
2) Desain semi-rasional dan teknologi mikroplat digunakan untuk menyaring pustaka yang jenuh situs. Kedua metode menghasilkan mutan RNA polimerase T7 dsRNA rendah. Mempertimbangkan kandungan dsRNA sambil memastikan bahwa indikator lain tidak berkurang (seperti integritas/efisiensi pembatasan/hasil, dll.), beberapa mutan dipilih dan satu bernama CleaScrip™ T7 digunakan untuk aplikasi komersial.
Data Produk
Dalam skenario aplikasi panjang yang berbeda, RNA Polimerase T7 dsRNA rendah telah menunjukkan penurunan yang sangat signifikan dibandingkan dengan T7 WT dan produk kompetitif, sambil memastikan bahwa Hasil dan integritas tidak berkurang.
| Panjang Fragmen | Polimer RNA T7 | Menghasilkan(Jumlah gram/ml) |
Integritas(%) | Kandungan dsRNA (ng dsRNA yang diproduksi per 1ug RNA) |
| 4K | T7-WT | 12.4 | 88.3 | 0.4273 |
| BersihScrip™ T7 | 12.1 | 89.9 | 0,0129 | |
| Perusahaan A | 11.0 | 87.8 | 0,0323 | |
| 9 ribu | T7-WT | 9.5 | 81.9 | 2.9180 |
| BersihScrip™ T7 | 9.0 | 82.0 | 0,0379 pukul 0,0379 | |
| Perusahaan A | 7.2 | 78.7 | 0.1805 |
Menggunakan Konsentrasi cap sebesar 2,5 mM, efisiensi capping yang sangat baik masih dapat dicapai pada panjang fragmen yang berbeda dibandingkan dengan WT. Selain itu, kinerja ekspresi protein yang unggul juga diamati pada tingkat sel.
| Tutup input analog（Bahasa Inggris) | Efisiensi Pembatasan (%)4K | |
| Berat Badan | dsRNA rendah | |
| 10 | 100 | 100 |
| 5 | 100 | 100 |
| 2.5 | 100 | 100 |
Paten telah diajukan di Amerika Serikat.
Informasi Produk
| Nama Produk | Nomor katalog | Spesifikasi | Volume |
| PembersihanWaktu Standar Polimerase RNA T7 (dsRNA rendah, 250 U/μL) | 10628ES | 100/2500/25.000 KU | 400 μL/10ml/100ml |
| PembersihanWaktu Standar T7 RNA Polimerase GMP-grade (dsRNA rendah, 250 U/μL) | 10629ES | 100/2500/25.000 KU | 400 μL/10ml/100ml |