Mengurangi waktu secara efisien, pastikan kualitas dengan peningkatan terbaru ke proses transkripsi mRNA OnePot!

Dalam beberapa tahun terakhir, pengembangan dan penerapan teknologi mRNA terus menarik perhatian. Obat mRNA melibatkan inokulasi mRNA yang mengkodekan protein antigen ke dalam tubuh manusia. Dengan memanfaatkan materi genetik di dalam sel manusia, obat tersebut mengekspresikan dan mensintesis protein antigen. Proses ini menginduksi dan mengaktifkan sistem kekebalan tubuh melalui protein antigen, yang bertujuan untuk mencegah dan mengobati penyakit. Obat mRNA memiliki keunggulan seperti keamanan, efisiensi, dan siklus pendek. Obat ini dapat secara bersamaan menginduksi kekebalan humoral dan seluler dan telah diterapkan dalam berbagai indikasi, termasuk tumor, penyakit menular, penyakit langka, penyakit kardiovaskular, dan banyak lagi.

Seluruh proses pengembangan obat mRNA secara kasar dapat dibagi menjadi beberapa langkah:

Penentuan dan desain sekuens—transkripsi mRNA in vitro—persiapan enkapsulasi

Itu konvensional langkah-langkah transkripsi mRNA in vitro (IVT) meliputi:

Ekstraksi dan linearisasi DNA plasmid—Pemurnian DNA Plasmid—Transkripsi in vitro (penutupan ko-transkripsi)—Pemurnian—larutan stok mRNA

Itu satu pot Proses transkripsi mRNA in vitro (IVT) meliputi:

Ekstraksi dan linearisasi DNA plasmid—Transkripsi in vitro (penutupan ko-transkripsi)—Pemurnian—larutan stok mRNA

Saat ini, sebagian besar proses yang ada melibatkan satu langkah pemurnian tunggal untuk DNA plasmid setelah pembelahan enzimatik sebelum langkah IVT. Yeasen Biotechlogy, yang berbasis pada pusat pengembangan aplikasi mRNA yang matang, telah mengembangkan proses "Transkripsi mRNA Onepot". Dalam proses ini, DNA plasmid sirkuler tidak dimurnikan setelah pembelahan enzimatik; sebaliknya, DNA tersebut langsung digunakan untuk transkripsi in vitro, sehingga menghasilkan larutan stok mRNA berkualitas tinggi. Seluruh proses ini, selain memastikan kualitas produk dan proses, juga memperpendek durasi proses yang ada.

Keunggulan proses:

1. Optimalisasi proses, mengurangi langkah IVT untuk pengoperasian yang lebih sederhana.
2. Biaya material lebih rendah, menghilangkan kebutuhan pemurnian pasca-pembelahan dan pemeriksaan kualitas.
3. Menjaga kualitas dan hasil mRNA.

Data:

1. Hasil dan Integritas:

Menggunakan 1μg plasmid 2K, 4K, dan 9K yang dilinearisasi, proses onepot dapat menghasilkan 150-200μg mRNA.

Panjang	Hasil panen	Integritas
2 ribu	200 mikrogram	94,00%
4K	185 mikrogram	92,20%
9 ribu	150 mikrogram	87,50%

Pengujian integritas dilakukan menggunakan elektroforesis kapiler (CE) untuk menilai integritas fragmen dengan panjang 2K, 4K, dan 9K. Integritas fragmen 2K dan 4K >92%, dan integritas fragmen 9K >87%.

2. Deteksi Efisiensi Pembatasan mRNA

LC-MS digunakan untuk menilai efisiensi pembatasan sekuens 2K, dan menunjukkan efisiensi pembatasan sebesar 99,5%.

Gambar atas: Kromatogram UV HPLC

Gambar bawah: Spektrum berat molekul yang didekonvolusikan

3. Deteksi Efisiensi Poliadenilasi mRNA

LC-MS digunakan untuk mendeteksi efisiensi poliadenilasi sampel, menunjukkan hasil yang terdistribusi normal.

Gambar atas: Kromatografi cair Kromatogram TIC

Gambar bawah: Spektrum berat molekul yang didekonvolusikan

4.Ekspresi mRNA Pengujian

Transfeksi sel 293T dengan produk mRNA yang disintesis menggunakan konvensional proses (Kiri, plasmid linierisasi aku(pemurnian) dan proses satu pot (Kanan, plasmid linierisasi tanpa pemurnian) tidak menunjukkan perbedaan dalam ekspresi protein fluoresensi setelah 24 jam kultur.

Informasi Pemesanan