Pengurutan generasi berikutnya (NGS) telah menunjukkan prospek aplikasi penelitian klinis dan ilmiah yang sangat luas di berbagai bidang seperti deteksi patogen, deteksi mutasi tumor, dan genetika reproduksi karena sensitivitas deteksinya yang tinggi, spesifisitas yang kuat, dan kemampuan untuk melakukan deteksi kualitatif dan kuantitatif. Konstruksi pustaka, sebagai langkah inti dalam NGS, secara langsung memengaruhi kualitas pengurutan. Berdasarkan pedoman tinjauan registrasi untuk produk diagnostik in vitro (IVD), data penelitian bahan baku utama perlu disediakan. Analisis dan verifikasi yang komprehensif harus dilakukan dengan menggabungkan faktor-faktor seperti informasi dasar, indikator parameter, dan sumber pasokan bahan baku untuk menentukan sumber bahan baku yang paling sesuai. Proses konstruksi perpustakaan DNA dan RNA konvensional terutama mencakup langkah-langkah utama seperti sintesis cDNA, fragmentasi DNA, ligasi adaptor, dan amplifikasi perpustakaan, Berbagai tahapan tersebut mengandung banyak jenis enzim bahan baku. Penyaringan enzim bahan baku yang luas akan memperpanjang siklus penelitian. Atas dasar ini, produk modul konstruksi perpustakaan yang hemat biaya dan sederhana telah menjadi pilihan baru untuk pengembangan produk IVD.
Gambar 1. Proses konstruksi pustaka DNA konvensional (kiri) dan proses konstruksi pustaka RNA (kanan), mengambil platform Illumina sebagai contoh
Sintesis transkripsi terbalik adalah bagian inti dari RNA-Seq, Baru tipe tinggi efisiensi reverse transcriptase, yang mengintegrasikan beberapa fungsi seperti sensitivitas tinggi, tinggi menghasilkan cDNA, dan kompatibilitas dengan templat struktur kompleks, merupakan topik penelitian yang menarik. Platform modifikasi enzim ZymeEditor™ dari
Gambar 2. Kinerja 13488ES yang diterapkan dalam RNA-seq
Dibatasi oleh panjang bacaan yang pendek dari platform pengurutan, DNA perlu difragmentasi secara acak sebelum konstruksi perpustakaan. Pada tahap awal, fragmentasi enzimatik sulit dilakukan karena masalah keseragaman dan bias.
Gambar 3. Efek fragmentasi dari berbagai enzim fragmentasi DNA: enzim fragmentasi yang bekerja kuat (kiri) dan enzim fragmentasi yang bekerja lemah (kanan)
Tingkat konversi perpustakaan merupakan indikator penting untuk mengevaluasi kualitas perpustakaan. Tingkat konversi perpustakaan yang tinggi sampai batas tertentu berarti kekayaan perpustakaan yang lebih baik dan keseragaman data sekuensing yang lebih baik. Ligase DNA T4 konvensional berfokus pada pengoptimalan ligasi efisiensi tinggi, tetapi fragmen rentan terhadap ligasi sendiri, yang mengurangi tingkat konversi perpustakaan dan memengaruhi kekayaan perpustakaan serta kualitas pengurutan. Itu
Gambar 4. Analisis stabilitas termal dan residu penghubung 12996ES
Enzim amplifikasi PCR semuanya diperlukan dalam metode persiapan pustaka NGS. Sebagian besar DNA polimerase dengan fidelitas tinggi mempunyai aktivitas polimerase 5'→3' dan aktivitas eksonuklease 3'→5'. Ia dapat mensintesis DNA dalam arah 5'→3' sambil mengoreksi basa yang dimasukkan secara salah, Dengan demikian, ia dapat memperbanyak fragmen DNA dengan cepat dan dengan ketepatan tinggi. Namun hanya sedikit enzim yang dirancang khusus untuk NGS, Tidak banyak produk amplifikasi perpustakaan yang efisien, akurat, spesifik, dan mampu mengamplifikasi target dengan ukuran dan kandungan GC yang berbeda tanpa bias, dan pada saat yang sama memiliki kemampuan untuk mencampur primer terlebih dahulu.
Gambar 5. Analisis stabilitas dan tingkat kesalahan amplifikasi 12980ES
Selain rangkaian produk modul konstruksi perpustakaan NGS di atas, Kami juga menyediakan produk enzim mentah satu atap, untuk memenuhi kebutuhan gabungan dari berbagai pelanggan.
| Kategori produk | Nama Produk | Nomor Kucing. | Komentar |
| Sintesis cDNA yang efisien | Hifair™ Transkriptase Terbalik Ultra (200 U/μL) | 14604ES | Enzim transkripsi terbalik |
| Sistem Penginderaan Jauh Hieff™ Kit Sintesis ds-cDNA | 13488ES | Modul sintesis cDNA | |
| DNA Fragmentasi & Perbaikan Akhir & A- Tailing | Bahasa Indonesia: Hieff™ Smerase | 12907ES | Fragmentasi DNA |
| Modul Fragmentasi DNA Hieff NGS™ OnePot Pro (perbaikan akhir dan dA-tailing plus) | 12619ES | DNA Modul Fragmentasi & Perbaikan Akhir & A- Tailing | |
| Perbaikan & A-Tailing | Modul Perbaikan Ujung Cepat Hieff NGS®/dA-Tailing | 12608ES | Modul Perbaikan Akhir & A-Tailing |
| Ligasi adaptor | 10299ES | T4 DNA ligase | |
| Amplifikasi perpustakaan | Campuran Amplifikasi Ultima HF 2× | 13344ES | Enzim fidelitas tinggi |