Kuantifikasi asam nukleat, sebagai salah satu eksperimen paling mendasar dalam biologi molekuler, secara langsung memengaruhi hasil eksperimen selanjutnya. Keakuratan kuantifikasi asam nukleat sangat penting. Saat ini, ada dua metode utama kuantifikasi pustaka NGS, metode penyerapan ultraviolet, dan metode pewarna fluoresen.

Metode penyerapan ultraviolet menggunakan spektrofotometer untuk mengukur absorbansi pada 260 nm untuk DNA dan RNA hingga kuantifikasi. Metode ini juga memperkirakan kemurnian asam nukleat dengan menghitung rasio OD260/OD280. Namun, nilai yang terdeteksi sangat rentan terhadap gangguan dari kontaminan lain seperti nukleotida bebas, garam, dan senyawa organik.

Kuantisasi fluorometrik qubit menggunakan pewarna fluoresensi yang secara khusus mengikat DNA untai ganda, DNA untai tunggal, RNA, atau protein. Setelah dieksitasi oleh sumber cahaya dengan panjang gelombang tertentu, pewarna memancarkan fluoresensi, yang tidak terpengaruh oleh molekul pengotor lain yang mungkin ada dalam sampel. Intensitas fluoresensi sebanding dengan konsentrasi molekul target dalam sampel.

Tabel 1. Perbandingan Metode Kuantifikasi Asam Nukleat Umum

Target	UV Abs (Nanodrop)	Qubit DNA HS	DNA Qubit BR	RNA Qubit-nya	Qubit ssDNA
Jenis asam nukleat	DNA dan RNA	DNA-DNA	DNA-DNA	RNA	ssDNA, oligo
Konsentrasi Sampel（ng/μL）	2 ng/μL-15 μg/μL	10 pg/µL-100 ng/µL	0,1 ng/µL-1000 ng/µL	250 pg/µl-1000 satuan ng/µl	50 pg/μL-200 ng/μL
Keuntungan	Batas kuantifikasi yang lebih tinggi	Spesifisitas yang baik	Berbagai macam kuantifikasi	Sangat selektif untuk RNA	Ditoleransi dengan baik
Keterbatasan	Spesifisitas buruk	Lindungi dari cahaya saat digunakan	Lindungi dari cahaya saat digunakan	Lindungi dari cahaya saat digunakan	Spesifisitas buruk dan juga mengikat dsDNA

Absorbansi UV dan kuantisasi fluorometrik Qubit masing-masing memiliki kelebihan dan dapat saling melengkapi. Untuk kuantifikasi awal sampel asam nukleat rutin guna menentukan konsentrasi, kemurnian, dan keberadaan kontaminan, metode kuantifikasi absorbansi dapat dipilih. Kuantifikasi qubit lebih cocok untuk sampel berharga konsentrasi rendah atau kuantifikasi tepat yang diperlukan untuk eksperimen hilir, seperti pengurutan generasi berikutnya dan PCR kuantitatif waktu nyata.

Yeasen telah meluncurkan beberapa produk kuantifikasi Qubit: dsDNA HS Assay Kit untuk Qubit^® (Cat#12640), Siap pakai: 1× Kit Uji HS dsDNA untuk Qubit^® (Cat#12642), Kit Uji ssDNA untuk Qubit^® (Cat#12645), dan dsDNA BR Assay Kit (Cat#12643), yang telah dipuji secara luas sejak peluncurannya.

Solusi 1 dsDNA HS Kuantifikasi Sensitivitas Tinggi

Premix kuantifikasi dsDNA siap pakai—1× Kit Uji dsDNA HS untuk Qubit^®

^{Pengoperasian yang mudah: Campuran siap pakai, tidak perlu pencampuran awal;}

^{Sensitivitas tinggi: Konsentrasi yang dapat dideteksi serendah 50 pg/μL;}

^{Stabilitas yang baik: Sinyal fluoresensi bertahan selama 3 jam, dan penyimpanan suhu ruangan selama 20 hari tidak mempengaruhi keakuratan kuantifikasi;}

^{A. Stabilitas luar biasa: Penyimpanan pada suhu ruangan selama 2 minggu masih mempertahankan stabilitas (nilai terukur menyimpang dari nilai teoritis kurang dari 10%).}

Tabel 2. Uji Stabilitas Berbagai Sampel pada Suhu 4°C dan Suhu Ruangan Dibandingkan dengan Kompetitor

Reagen kuantitatif	Bertekad konsentrasi dari λDNA (ng/μL)
	0 hari		1 hari		3 dimensi	tanggal 7 hari			10 hari		14 hari
T* 4℃	0.51		0.496		0,524 tahun	0,534 tahun			0.495		0.499
Yeasen 4℃	0.51		0,508		0.513	0,475 tahun			0.48		0.495
Yeasen suhu ruangan penyimpanan	0.51		0.517		0.506	0.486			0.506		0.523
Reagen kuantitatif	Bertekad konsentrasi dari gDNA anak sapi (ng/μL)
	0 hari	1 hari		3 dimensi			tanggal 7 hari	10 hari		14 hari
T* 4℃	55.3	53.5		55.40			57.9	55.8		58
Yeasen 4℃	59.4	55.4		57.8			56.1	56.3		59.8
Yeasen suhu ruangan penyimpanan	59	55.7		61.3			58	58.7		56.1

B. Sensitivitas tinggi, stabilitas batch-ke-batch yang baik

Tabel 3.Uji Stabilitas Berbagai Batch

Batch	Mencicipi	L*			Yeasen			kesalahan
		konsentrasi 1 (ng/μL)	konsentrasi2（ng/μL）	Rata-rata (ng/μL)	konsentrasi 1 (ng/μL)	konsentrasi2（ng/μL）	Rata-rata (ng/μL)
D9801060	DNA	0.3160	0.3250	0.3205	0.320	0.320	0.320	0,16%
D8801050		0.3310	0.3320	0.3315	0.319	0.306	0.3125	5,73%
D7813110		0,345 tahun	0.358	0.352	0.334	0.329	0.332	-6,03%

Solusi 2 Kuantifikasi Rentang Luas dsDNA BR

Kuantifikasi dsDNA rentang luas—Kit Uji dsDNA BR

Sensitivitas tinggi: Konsentrasi yang dapat dideteksi serendah 50 pg/μL;

Linearitas yang sangat baik: Linearitas yang baik dalam kisaran 2-1000 ng;

Toleransi yang kuat terhadap kontaminan: Dapat mentoleransi kontaminan umum.

Tabel 4. Stabilitas dan Toleransi terhadap Kontaminan Dibandingkan dengan Pesaing

Yeasen Bahasa Inggris						T* Bahasa Inggris
standar	RFU1	Bahasa Indonesia: RFU2	Rata-rata	kesalahan		standar	RFU1	RFU2	Rata-rata	kesalahan
S1	159.63	160.71	160.17	1%		S1	216.17	211.56	213.865	-2%
S2	24497.0	25078.64	24787.82	2%		S2	20532.46	20452.26	20492.36	0%
pengukuran						pengukuran
Kontaminan	Konsentrasi dalam sampel 10-μL	konsentrasi1	konsentrasi2	Rata-rata	Akan diuji/dikendalikan	Kontaminan	Konsentrasi dalam sampel 10-μL	konsentrasi1	konsentrasi2	Rata-rata	Akan diuji/dikendalikan
Kontrol (H2HAI)	/	49	48.6	48.8	0,0%	Kontrol (H2HAI)	/	49.8	48	48.9	0,0%
BSA	1mg/ml	51.8	52	51.9	6,4% dari	BSA	1mg/ml	54	51.2	52.6	7,6% dari total
Etanol	20%	44.6	44	44.3	-9,2%	Etanol	20%	44.8	43.4	44.1	-9,8%
khloroform	4,00%	49.0	49.8	49.4	1,2%	khloroform	4,00%	50.0	47	48.5	-0,8%
SD	0,2%	46.6	45.8	46.2	-5,3%	SD	0,2%	53.2	51.6	52.4	7,2% dari total
Trition-X100	0,20%	41.6	40.6	41.1	-15,8%	Trition-X100	0.20%	53	51	52.0	6,3%
dNTP (dNTP)	2 juta	44.2	45	44.6	-8,6%	dNTP (dNTP)	2 juta	47.8	46.4	47.1	-3,7%

Solusi 3 Kuantifikasi ssDNA

Pilihan ideal untuk kuantifikasi ssDNA—Kit Uji ssDNA Berkinerja Tinggi untuk Qubit^®

^{Sensitivitas tinggi: Konsentrasi yang dapat dideteksi serendah 50 pg/μL;
Linearitas yang sangat baik: Linearitas yang baik dalam kisaran 0-200 ng;
Sinyal stabil: Pewarna yang sangat baik dikombinasikan dengan Buffer yang dioptimalkan dan ditingkatkan, dapat mempertahankan intensitas fluoresensi yang stabil pada suhu ruangan, dan sangat dapat diaplikasikan bahkan di lingkungan polusi umum seperti garam, nukleotida bebas, pelarut, deterjen, atau protein, memastikan kuantifikasi yang akurat;
Stabilitas yang baik: Tidak ada perubahan kinerja yang signifikan setelah 6 bulan perawatan pada suhu 4°C atau 25°C;
Rentang aplikasi yang luas: Proses operasi sederhana, memungkinkan kuantifikasi cepat oligonukleotida, primer, DNA terdenaturasi, DNA sirkular untai tunggal, dll.}

A. Pengulangan yang baik: Kuantifikasi dalam instrumen Qubit yang berbeda, berbagai jenis sampel menggunakan Yeasen beberapa batch Cat#12645 diuji. Dalam kisaran 0-200ng, pengulangan yang baik dalam pengukuran dari berbagai instrumen Qubit.