Manusia Wnt3a diekspresikan dalam sel HEK293 menunjukkan aktivitas tinggi yang mempromosikan penanaman organoids

Organoid adalah model tiga dimensi yang dibuat secara in vitro yang sangat mirip dengan jaringan atau organ alami, dan memiliki signifikansi yang signifikan dalam ranah pemodelan penyakit, peremajaan organ, dan perawatan medis individual. Pembudidayaan organoid ini memerlukan pengelolaan yang cermat terhadap beragam sitokin, dengan Wnt3a menonjol sebagai faktor yang sering digunakan yang berperan penting dalam memelihara organoid yang berasal dari berbagai jaringan.

Apa itu Wnt-3a?

Wnt-3a termasuk dalam famili Wnt, yaitu sekelompok protein yang disekresikan yang terdiri dari 19 varian manusia, termasuk Wnt1, Wnt2, Wnt2b (Wnt13), Wnt3, Wnt3a, Wnt4, Wnt5a, Wnt5b, Wnt6, Wnt7a, Wnt7b, Wnt8a, Wnt8b, Wnt9a (juga dikenal sebagai Wnt14), Wnt9b (Wnt14b), Wnt10a, Wnt10b, Wnt11, dan Wnt16. Famili ini dicirikan oleh komposisi yang kaya akan sistein dan bersifat konservasi. Protein Wnt memfasilitasi jalur pensinyalan Wnt dengan mengikat reseptor membran sel atau reseptor membran sel di sekitarnya. Jalur ini dapat dikategorikan ke dalam jalur kanonik, yang dimediasi oleh β-catenin, yang meliputi Wnt1, Wnt2, Wnt2b, Wnt3, Wnt3a, Wnt7a, Wnt8, Wnt8b, dan Wnt10a, dan jalur non-kanonik, yang tidak bergantung pada β-catenin, yang meliputi Wnt4, Wnt5a, Wnt6, dan Wnt11. Wnt3a, sebagai anggota inti keluarga Wnt, tersebar di mana-mana dan memainkan peran penting dalam mengatur berbagai fungsi seluler, seperti pembaruan diri, proliferasi, diferensiasi, dan motilitas.

Mekanisme Transduksi Jalur Sinyal Wnt-3a

Jalur pensinyalan Wnt merupakan jaringan interaksi protein multifaset yang utamanya terkait dengan perkembangan embrio dan kanker. Akan tetapi, jalur ini juga berperan dalam proses fisiologis normal pada organisme dewasa. Wnt3a mengikat reseptornya, protein Frizzled (Fz), bersama dengan protein terkait reseptor lipoprotein koreseptor (LRP5/6), yang kemudian mengaktifkan protein perancah Disheveled (Dvl). Aktivasi ini menyebabkan pembongkaran "kompleks penghancuran," yang terdiri dari Casein kinase 1 (CK1), glycogen synthase kinase-3β (GSK-3β), dan protein perancah adenomatous polyposis coli (APC), Axin1, dan Axin2. Pelarutan kompleks ini menstabilkan protein β-Catenin bebas dalam sitoplasma. β-Catenin yang terakumulasi dalam sitoplasma kemudian ditranslokasi ke dalam nukleus, tempat ia mengikat faktor transkripsi dari keluarga TCF/LEF, yang pada akhirnya mengaktifkan gen target hilir seperti c-myc dan Cyclin D1. Kaskade ini menginduksi respons seluler berikutnya. Singkatnya, jalur pensinyalan Wnt dapat disederhanakan sebagai berikut: Wnt3a→FZD→DVL→pelarutan kompleks→β-Catenin memasuki nukleus→TCF/LEF→transkripsi gen hilir. Tanpa Wnt3a, β-catenin biasanya terdegradasi dalam sitoplasma oleh "kompleks penghancuran," yang menargetkannya untuk ubikuitinasi dan degradasi berikutnya dalam proteasom. Akibatnya, ia tidak dapat memasuki nukleus untuk memulai transkripsi gen hilir. Jalur pensinyalan Wnt/β-catenin sangat terpelihara sepanjang evolusi dan memainkan peran mendasar dalam perkembangan embrio, pertumbuhan sel, diferensiasi, pembentukan polaritas, perkembangan saraf, dan karsinogenesis.

Wnt3a dan Organoid

Wnt3a memegang posisi sentral sebagai salah satu faktor kultur yang paling sering digunakan untuk pembentukan organoid. Aktivitasnya yang tinggi, konsistensi antar kelompok, tidak adanya kontaminasi, dan persiapan bebas serum merupakan faktor kunci yang berkontribusi terhadap keberhasilan percobaan organoid.Wnt3a telah banyak digunakan dalam kultur organoid berbagai jaringan, termasuk usus, lambung, pankreas, hati, tiroid, esofagus, dan sistem saraf. Dalam upaya membantu peneliti ilmiah dan perusahaan farmasi dalam studi mereka tentang aplikasi klinis Wnt3a dalam pembentukan organoid dan penelitian tumor, Yeasen telah memperkenalkan produk protein Wnt3a yang sangat aktif (Katalog: 92276ES) yang dirancang untuk memfasilitasi kultur organoid.

Gambar 3. Diukur berdasarkan kemampuannya untuk menginduksi aktivitas reporter Topflash pada sel ginjal embrio manusia HEK293T. ED50 untuk efek ini adalah 25 ng/mL.

Validasi Kultur Organoid

Yeasen sitokin telah diverifikasi pada organoid tumor manusia seperti kanker paru-paru, kanker serviks, kanker ovarium, kanker pankreas dan kanker usus, dan organoid normal seperti organoid usus halus manusia dan tikus.

Sitokinin Terkait informasi