UCF.ME™ UltraNuclease, atau dikenal juga sebagai Totipotent nuclease, broad-spectrum nuclease, dan non-limiting Inhibitory endonuclease, berasal dari Serratia Marcescen tetapi kemudian direkayasa ulang dan diproduksi oleh
1. Apa itu nuklease totipoten?
2. Apa saja skenario penggunaan nuklease totipoten?
3. Apa saja keuntungan yang harus dimiliki nuklease totipoten?
4. Tanya Jawab
5. Produk Terkait
1. Apa itu nuklease totipoten?
Nuklease totipoten adalah endonuklease yang dimodifikasi secara genetik dengan kemampuan untuk mendegradasi berbagai bentuk asam nukleat, meliputi asam nukleat untai tunggal, untai ganda, linier, asli, dan terdenaturasi. Nuklease ini menghasilkan oligonukleotida 5'-monofosfat dengan panjang berkisar antara 3 hingga 5 basa dan tidak menunjukkan pengenalan basa tertentu. Nuklease serbaguna ini menunjukkan stabilitas dan aktivitas pencernaan yang kuat dalam berbagai kondisi, sehingga sangat efisien untuk menghilangkan residu asam nukleat dalam sampel atau produk. Hal ini meningkatkan kemurnian sampel dan efektivitas biologis produk, menjadikan nuklease totipoten sebagai sediaan enzim pilihan untuk penelitian ilmiah, vaksin, dan industri seperti protein dan polisakarida farmasi.
Lebih jauh lagi, nuklease totipoten memainkan peran penting dalam penghilangan asam nukleat selama penyiapan vaksin, antibodi, terapi sel, dan produk biologis lainnya, memastikan kepatuhan terhadap peraturan FDA yang menetapkan bahwa asam nukleat residual dalam produk akhir untuk penggunaan terapeutik tidak boleh melebihi 10 pg/dosis. Dengan mendegradasi asam nukleat, nuklease totipoten mengurangi viskositas lisat sel, memfasilitasi proses filtrasi/ultrafiltrasi larutan selama pemurnian partikel yang berasal dari sel seperti virus, vektor AAV, dan badan inklusi. Hal ini memperlancar pemrosesan, meningkatkan sentrifugasi, meningkatkan efisiensi pemisahan presipitasi dan supernatan, dan meningkatkan efektivitas pemurnian kromatografi, yang pada akhirnya meningkatkan hasil dan kemurnian produk.
2. Apa saja skenario penggunaan nuklease totipoten?
UltraNuclease memiliki berbagai macam aplikasi dan berikut adalah skenario penggunaan spesifiknya.
2.1 Pemurnian virus (lentivirus, AAV, vaksin adenovirus rekombinan, virus yang dinonaktifkan, virus onkolitik, dll.)
Pemanfaatan virus dalam sektor biomedis berkembang pesat, mencakup aplikasi seperti vaksin, terapi sel, terapi gen, dan berbagai bidang lainnya. Sel inang yang bertanggung jawab atas produksi virus sebagian besar adalah sel lintasan kontinu (CCL). CCL menunjukkan kecenderungan genetik untuk pertumbuhan yang tidak diatur, yang memberi mereka kemampuan untuk berkembang biak tanpa batas. Namun, keberadaan DNA residual dari CCL dapat menimbulkan risiko potensial, seperti proliferasi sel manusia yang tidak terkendali yang menyebabkan pembentukan tumor. Lebih jauh, fragmen DNA residual ini mungkin mengandung genom virus yang menular, meningkatkan kekhawatiran tentang risiko infeksi di samping tumorigenesis. Akibatnya, langkah-langkah pengendalian yang ketat sangat penting untuk mengelola DNA residual dalam produk biologis, memastikan keamanannya. Dalam hal ini, UCF kami.ME™ UltraNuclease menawarkan solusi aman untuk pemurnian virus.
Garam memainkan peran penting dalam mengurangi agregasi protein atau virus, memfasilitasi pemisahan DNA dan RNA dari protein dan komponen seluler lainnya. Salt Active UltraNuclease, sebagai endonuklease nonspesifik, menunjukkan aktivitas optimal pada konsentrasi garam tinggi. Dalam kondisi garam tinggi, enzim memperoleh akses yang lebih baik ke DNA dan RNA yang dilepaskan, meningkatkan degradasinya. Nuklease dengan aktivitas tinggi di lingkungan garam tinggi terbukti lebih efektif dalam meningkatkan proses pemurnian. Salt Active UltraNuclease dapat digunakan untuk mengurangi viskositas dalam supernatan dan lisat sel, meningkatkan efisiensi pemurnian dalam kondisi garam tinggi. Enzim ini juga mengurangi residu asam nukleat inang ke tingkat pikogram, sehingga meningkatkan kinerja dan keamanan berbagai aplikasi produk biologis, termasuk pemurnian virus, pembuatan vaksin, dan produksi protein dan polisakarida farmasi.
2.2 Pemurnian protein rekombinan yang diekspresikan dalam E. coli
Protein tertentu yang diekspresikan dalam E. coli memiliki kecenderungan untuk beragregasi menjadi badan inklusi, yang mempersulit proses pemurnian karena sering kali terjalin dengan DNA inang. Sel bakteri yang pecah akibat hal tersebut dapat menunjukkan viskositas tinggi, yang secara signifikan mengurangi efisiensi pemurnian protein. Namun, dengan memasukkan 10-50 U/mL UCF.ME™UltraNuclease ke dalam larutan bakteri selama disrupsi ultrasonik dan menginkubasi sampel pada suhu 37°C selama 30 menit atau 4°C semalaman setelah disrupsi selesai, viskositas dalam larutan bakteri dapat dikurangi secara efektif. Hal ini, pada gilirannya, secara substansial meningkatkan efisiensi proses pemurnian. Singkatnya, Anda dapat mengandalkan UCF.ME™ UltraNuclease kami untuk memfasilitasi pemurnian protein yang efektif.
2.3 Mencegah penggumpalan sel
Dalam beberapa tahun terakhir, penggunaan sel mononuklear darah tepi (PBMC) yang dikriopreservasi dalam uji imuno telah meningkat secara dramatis. Karakteristik terbesar sel PBMC adalah sangat mudah menggumpal setelah resusitasi, yang dapat dengan mudah menyebabkan kualitas sel rendah dan hasil uji yang tidak dapat diandalkan. Ketika sel diresusitasi, konsentrasi yang tepat (25-50 U/mL) UCF.ME™UltraNuclease ditambahkan ke media kultur dan sel dikultur bersama, yang secara efektif dapat mencegah penggumpalan sel. Oleh karena itu, Anda dapat memanfaatkan UCF.ME™ UltraNuclease kami sebaik-baiknya untuk meningkatkan kemungkinan hasil yang berhasil.
3. Apa saja keuntungan yang harus dimiliki nuklease totipoten?
3.1 Berbagai macam aplikasi
UCF.ME™ UltraNuclease dapat memotong dan mendegradasi berbagai bentuk DNA dan RNA dalam berbagai kondisi percobaan dan dapat diterapkan untuk menghilangkan sisa asam nukleat dalam berbagai produk biologis.
3.2 Kemurnian tinggi, aktivitas enzim tinggi
Untuk UCF.ME™ UltraNuclease kami, kemurnian enzimnya lebih besar atau sama dengan 99% (HPLC), dan aktivitas enzimnya lebih besar atau sama dengan 1,5*106 U/mg (menggunakan metode kuantitatif absolut untuk substrat umum).
3.3 Kemampuan beradaptasi yang kuat
UCF.ME™ UltraNuclease memiliki stabilitas tinggi dalam penyimpanan dan pembekuan-pencairan. Kami menyimpan UCF.ME™ UltraNuclease pada suhu -20 °C, 4 °C, dan 37 °C untuk mendeteksi tren aktivitas enzim. Ketika ditempatkan pada suhu 37 °C selama 2 minggu, tidak ada perubahan signifikan dalam aktivitas enzim.Sementara itu, untuk memastikan stabilitas enzim, kami menggunakan kombinasi es kering + bungkus es untuk mengangkut UCF.ME™ UltraNuclease siap digunakan di tempat Anda. Produk ini juga memiliki toleransi yang kuat dan dapat beradaptasi dengan berbagai kondisi pengoperasian.
3.4 Mematuhi Farmakope
UCF.ME™ UltraNuclease diproduksi di UCF.ME (Pabrik Ultra Bersih. Enzim Molekuler) yang merupakan jenis enzim Ultra-bersih. Apa itu enzim Ultra-bersih? Ini adalah enzim molekuler yang mencapai standar kualitas tanpa HCD、HCR、HCP, BEBAS DNASE、BEBAS RNASE, tanpa residu protease, tanpa residu mikroba, tanpa patogen, berasal dari hewan, polusi antibiotik, residu endotoksin sangat rendah, aktivitas enzim tinggi, dan kemurnian tinggi, dll. Oleh karena itu, Anda dapat mempercayai produk kami, dengan aman dan andal.
3.5 Produksi GMP
Seluruh proses produksi UltraNuclease diselesaikan di bengkel produksi GMP, dan rencana pemeriksaan kualitas dilakukan secara ketat oleh farmakope metode, memenuhi permintaan skala besar mulai dari penelitian dan pengembangan hingga produksi.
UCF.ME™ Mitra UltraNuclease —— Kit ELISA UltraNuclease
Dalam langkah pemurnian normal, UCF.ME™ UltraNuklease mudah dihilangkan sebagai kotoran. Untuk mendeteksi residu UCF.ME™ UltraNuklease,
UltraNuklease Peralatan ELISA
Rentang liniernya antara 0,047 dan 3 ng/mL, dan R2 lebih besar dari 0,99. Dengan reproduksibilitas antar-batch yang baik, kami menambahkan konsentrasi UltraNuclease yang tetap ke sampel dan menggunakan 3 batch kit ELISA yang berbeda untuk deteksi. Tingkat pemulihan deteksi antara 70% dan 110% ketika konsentrasi nuklease antara 3 dan 0,186 ng/mL, dan CV kurang dari 10%. Terlebih lagi, tingkat pemulihan sampel UltraNuclease yang disimulasikan dengan konsentrasi yang berbeda semuanya antara 70% dan 130% dan lebih baik daripada merek lain. Ia juga memiliki spesifisitas yang kuat sehingga kami mengevaluasi pengikatan non-spesifik antibodi UltraNuclease ke 8 sampel umum. Hasil kelompok interferensi dan kelompok kontrol tumpang tindih, dan tidak ada interferensi yang terlihat.
Setelah pengajuan DMF UltraNuclease,
Nomor pengajuannya adalah:
| Nomor | Nama Produk | Nomor Pengarsipan |
| 1 | UltraNuklease | Nomor MF037298 |
| 2 | Garam Aktif UltraNuklease | Nomor MF037815 |
4. Tanya Jawab
Q1: Pada langkah mana menambahkan UltraNuclease?
J: Tergantung pada sampel yang Anda tangani. Dalam pemurnian virus, umumnya ditambahkan setelah klarifikasi virus; dalam pemurnian protein E. coli, dapat ditambahkan saat sel-sel mengalami lisis; dalam penanganan penggumpalan sel, dapat langsung ditambahkan ke media untuk diko-kultivasi dengan sel.
Pertanyaan 2: Jika suhu reaksi tidak dapat mencapai 37°C, bagaimana cara menggunakannya?
A: Aktivitas enzim UltraNuclease dipengaruhi oleh suhu, waktu perlakuan, dan unit aktivitas enzim. Jika suhu tidak dapat mencapai 37°C, jumlah enzim dapat ditambahkan dengan tepat, atau waktu inkubasi dapat diperpanjang.
Q3: Apakah UltraNuclease kompatibel dengan inhibitor protease?
A: Kompatibel, tetapi perlu diketahui bahwa banyak inhibitor protease mengandung EDTA. Ketika EDTA mulai lebih tinggi dari 1mM, EDTA akan menghambat aktivitas beberapa nuklease.
Pertanyaan 4: Bagaimana cara menghilangkan UltraNuclease?
A: Ia dapat dihilangkan dengan metode seperti TFF, dialisis, dan kolom kromatografi.
Pertanyaan 5: Dapatkah kit ELISA UltraNuclease digunakan untuk mendeteksi residu nuklease totipoten merek lain?
A: Kami tidak menyarankan melakukan hal ini. Kit ELISA sepenuhnya dikembangkan berdasarkan UltraNuclease dan dapat mengukur UltraNuclease secara akurat. Nuklease altipoten dari merek lain mungkin berbeda dari UltraNuclease dalam hal urutan dan proses produksi, dan hasil pengujian mungkin tidak akurat.
5. Produk Terkait
Produk yang disediakan oleh
Tabel 1 Produk Terkait
| Nama Produk | SKU | Spesifikasi |
| Tahun 20157ES25/60/80/90 | 25KU/100KU/1MU/5MU | |
| Tahun 20159ES25/60/80/90 | 25KU/100KU/1MU/5MU | |
| 36701ES59 | 96T | |
| Garam Aktif Kit ELISA UltraNuclease | 36703ES96 | 96T |