Hieff NGS™ mRNA Isolation Master Kit adalah kit manik magnetik yang khusus digunakan untuk pemurnian mRNA. Manik-manik penangkap mRNA adalah mikrosfer paramagnetik berukuran mikrometer yang digabungkan dengan ekor Oligo dT (poli A), yang dapat digunakan untuk mengisolasi mRNA dari 10 ng hingga 4 μg RNA lengkap dengan mengikat mRNA dengan ekor poli A.

Spesifikasi

Komponen

Penyimpanan

Produk harus disimpan pada suhu 2 ~ 8℃ selama satu tahun dan dihindari pembekuan.

Instruksi

1. Bahan yang Diperlukan Tidak Termasuk

Rak magnetik, Tabung PCR bebas nuklease

2. Operasi

1) Menyeimbangkan Manik Penangkap mRNA pada suhu ruangan (~ 30 menit).

2) Encerkan 10 ng – 4 μg total RNA ke dalam 50 μL dengan air bebas Nuklease dalam tabung PCR bebas Nuklease, letakkan di atas es.

3) Campur manik-manik magnetik dengan cara dibalik atau diputar. Tambahkan 50 μL manik-manik magnetik ke dalam 50 μL sampel RNA total dan pipet 6 kali hingga tercampur rata. Putar sebentar hingga ke dasar tabung.

4) Inkubasi campuran manik-manik magnetik dan RNA dalam siklus termal dan jalankan program berikut: 65°C, 5 menit; 25°C, 5 menit; 25°C, tahan.

5) Letakkan tabung pada magnet rak selama 5 menit untuk memisahkan mRNA dari total RNA. Keluarkan cairan supernatan dengan hati-hati.

6) Lepaskan tabung dari magnet rak dan suspensikan kembali manik-manik magnetik dengan 200 μL Beads Wash Buffer. Pipet seluruh volume ke atas dan ke bawah 6 kali untuk mencampur secara menyeluruh. Letakkan tabung pada magnet rak selama 5 menit, dan dengan hati-hati keluarkan supernatan.

7) Ulangi langkah 6.

8) Lepaskan tabung dari magnet rakTambahkan 50 μL Tris Buffer untuk menangguhkan kembali manik-manik magnetik dan pipet 6 kali untuk mencampur secara menyeluruh.

9) Masukkan sampel ke dalam thermal cycler dan jalankan program berikut untuk mengeluarkan mRNA: 80°C, 2 menit; 25°C, tahan.

10) Keluarkan sampel dari thermal cycler. Tambahkan 50μL Beads Binding Buffer dan pipet berulang kali sebanyak 6 kali untuk mencampur secara menyeluruh.

11) Inkubasi pada suhu ruangan selama 5 menit untuk memungkinkan mRNA terikat pada manik-manik magnetik.

12) Tempatkan tabung pada magnet rak selama 5 menit, dan keluarkan supernatan dengan hati-hati.

[Catatan]: Pipet 10 μL diperlukan untuk menyedot sisa cairan.

13) Lepaskan tabung dari magnet rak, campurkan kembali manik-manik magnetik dengan 200 μL Beads Wash Buffer, pipet berulang kali 6 kali untuk mencampur secara menyeluruh. Letakkan tabung pada magnet rak pada suhu ruangan selama 5 menit. Buang semua cairan yang mengendap.

14) elusi akhir mRNA

Skema A: Untuk reaksi transkripsi cadangan

Lepaskan tabungnya dari magnetik rakTambahkan 12μL air bebas nuklease dan pipet berulang kali sebanyak 6 kali agar tercampur merata. Tempatkan tabung dalam siklus termal dan jalankan program berikut: 80°C, 2 menit. Kemudian letakkan tabung pada magnet rak segera, diamkan pada suhu ruangan selama 5 menit. Setelah larutan dijernihkan, aspirasikan 10 μL cairan supernatan dengan hati-hati ke dalam tabung PCR bebas Nuklease baru.

Skema B: Untuk RNA persiapan perpustakaan

Kit 12603 digunakan bersama dengan Kit 12308. Harap lihat produknya:

Kit Persiapan Pustaka mRNA Mode Ganda Hieff NGS™ Ultima -12308ES

Tambahkan volume Frag/Primer Buffer yang sesuai dengan petunjuk kit yang relevan untuk konstruksi perpustakaan.

Catatan

1. Demi keselamatan dan kesehatan Anda, harap kenakan jas lab dan sarung tangan sekali pakai selama pengoperasian.
2. Hanya untuk keperluan penelitian.
3. Pastikan untuk memanaskannya hingga mencapai suhu ruangan dan mencampurnya dengan baik sebelum menggunakan manik-manik magnetik, jika tidak, efisiensi pemulihan sampel dapat terpengaruh.
4. Operasi harus benar-benar bebas dari kontaminasi RNase dan asam nukleat.
5. Bila produk ini digunakan dengan reagen lain, harap ikuti petunjuk percobaan khusus untuk mengoperasikannya.
6. Untuk mendapatkan hasil pemurnian yang baik, Anda perlu memiliki integritas total RNA yang baik dan memastikan nilai RIN >7,0.