La coltura cellulare è un pilastro di molte applicazioni di ricerca, dallo sviluppo di farmaci alla terapia genica. Tuttavia, mantenere colture sane e proliferanti può essere difficile senza l'approccio e gli strumenti giusti. Che tu sia uno scienziato esperto o un novizio nella coltura cellulare, ottimizzare ogni fase del processo può fare la differenza. In questa guida, ti guideremo attraverso cinque suggerimenti essenziali per garantire che le tue colture cellulari prosperino, dalla digestione alla prevenzione della contaminazione.
1. Perfezionare la digestione cellulare
La digestione cellulare è un passaggio cruciale negli esperimenti di coltura cellulare, facilitando il distacco delle cellule dalla superficie di coltura e la loro separazione in una sospensione di cellule singole per la subcoltura e le analisi successive. La scelta del giusto enzima di digestione può migliorare l'efficienza della separazione cellulare, ridurre i danni cellulari e garantire un regolare progresso sperimentale. Per aiutarti a selezionare l'enzima di digestione più adatto alle tue esigenze, abbiamo compilato una guida su diversi prodotti enzimatici comunemente utilizzati e sulle loro caratteristiche. Puoi scegliere il prodotto più appropriato in base al tipo di cellula, ai requisiti sperimentali e alle applicazioni a valle.
Enzimi digestivi comuni
- Tripsina (utilizzata per idrolizzare le proteine intercellulari)
- Tripsina ricombinante (priva di contaminazione di origine animale, adatta per applicazioni biofarmaceutiche)
- Collagenasi (utilizzata per degradare le fibre di collagene, ideale per la digestione dei tessuti)
- Tripsina composita (come Accutase, che preserva meglio gli antigeni di superficie cellulare)
- Alternative alla tripsina (come TrypLE™, perfetto per colture cellulari senza siero)
- Dispasi II (per separare vari tessuti e cellule).
Ogni enzima ha le sue applicazioni e i suoi vantaggi unici e la scelta di quello giusto può migliorare significativamente l'efficienza sperimentale e la qualità dei risultati.
| Nome del prodotto | Numero di gatto | Specificazione |
| PerfettamenteCel™l Tripsina-EDTA (0,25%), NO Rosso fenolo | 40123ES60 | 100 ml |
| PerfCell™ Tripsina-no EDTA (0,25%), no rosso fenolo | 40124ES60 | 100 ml |
| PerfCell™ Tripsina (0,25%), rosso fenolo | 40126ES60 | 100 ml |
| PerfCell™ Tripsina-EDTA (0.25%), Rosso fenolo | 40127ES60 | 100 ml |
| Tripsina 1:250 (polvere) | 40101ES25 | 25 grammi |
| PerfCell™ Tripsina ricombinante(polvere） | 40512ES10/60 | 10 mg/100 mg |
| 20416ES60 | 100 ioG | |
| PerfCel Tryzyme™ Express Enzyme (1X), rosso fenolo | 40134ES60 | 100 ml |
| Enzima PerfCel Tryzyme™ Express (1X), NO Rosso fenolo | 40135ES60 | 100 ml |
| Soluzione di dissociazione cellulare ACCUTASE | 40506ES60 | 100 ml |
| Dispersione II | 40104ES60/80 | 100 mg/1 g |
2. Creare l'ambiente di coltura ideale
Una coltura sana inizia con l'ambiente giusto. Questo include una temperatura adatta, un pH e un terreno ottimale per il tuo tipo di cellula. Yeasen offre una gamma di terreni di coltura cellulare specificamente formulati per supportare una varietà di linee cellulari, fornendo loro i nutrienti essenziali e i fattori di crescita di cui hanno bisogno.
Coltura cellulare senza siero è emersa come una tecnologia fondamentale nella ricerca biologica, garantendo ripetibilità, coerenza e standard etici. Le colture cellulari tradizionali si basano sul siero fetale bovino (FBS), che comporta variabilità nei risultati sperimentali e rischi etici di origine animale. Per affrontare queste sfide, molti ricercatori stanno optando sempre più per terreni di coltura privi di siero.
Nella ricerca immunologica, coltura linfocitaria svolge un ruolo cruciale, specialmente nei campi della risposta immunitaria, dello sviluppo di vaccini e dell'immunoterapia del cancro. Come componenti centrali del sistema immunitario, i linfociti necessitano di condizioni di coltura specifiche per proliferare e attivarsi in vitro. Yeasen fornisce terreni di coltura progettati specificamente per la proliferazione e l'attivazione dei linfociti, che possono simulare accuratamente le risposte immunitarie in vivo e aiutare i ricercatori a ottenere dati più affidabili nell'attivazione delle cellule T, nella produzione di anticorpi e nella ricerca sull'immunologia cellulare.
Inoltre, coltura organoide rappresenta un altro importante progresso nella tecnologia delle colture cellulari. Gli organoidi sono strutture cellulari tridimensionali che possono simulare tessuti umani e funzioni di organi in vitro, fornendo una nuova piattaforma di ricerca per la modellazione delle malattie, lo screening dei farmaci e la medicina rigenerativa. La struttura tridimensionale degli organoidi replica meglio la complessità e le funzioni fisiologiche degli organi umani ed è diventata uno strumento importante per studiare lo sviluppo degli organi, i meccanismi delle malattie e le risposte terapeutiche.
| Nome del prodotto | Numero di gatto | Specificazione |
| Terreno di coltura cellulare di insetti CelCulSF™(Senza siero） | 40140ES | 1000 ml |
| Terreno di coltura cellulare CelCulSF™ 293(Senza siero） | 40141ES | 1000 ml |
| Terreno di coltura dei linfociti CelCulSF™(Senza siero） | 40142ES | 1000 ml |
| Terreno di coltura cellulare ibridoma CelCulSF™(Senza siero） | 40143ES | 1000 ml |
| Cellula staminale mesenchimale CelCulSF(MSC）Terreno di coltura(Senza siero） | 40144ES | 500 ml |
| Terreno di coltura cellulare aderente CelCulSF™(Siero ridotto） | 40145ES | 1000 ml |
| Cebrary® Terreno di coltura per organoidi intestinali (topo) | 41426ES60/76 | l00/500 ml |
| Cebrary® Terreno di coltura per organoidi del cancro intestinale (umano) | 41427ES50/60/76 | 50/l00/500 mL |
| Cebrary® Terreno di coltura organoide del cancro gastrico (umano) | 41428ES50/60/76 | 50/l00/500 mL |
| Cebrary® Terreno di coltura per organoidi del cancro al fegato (umano) | 41429ES50/60/76 | 50/l00/500 mL |
| Cebrary® Terreno di crescita organoide del cancro al seno (umano) | 41430ES50/60/76 | 50/l00/500 mL |
| Cebrary® Terreno di coltura per organoidi del cancro polmonare (umano) | 41431ES50/60/76 | 50/l00/500 mL |
| Cebrary® Esofageo Terreno di coltura per organoidi cancerosi (umani) | 41432ES50/60/76 | 50/l00/500 mL |
| Cebrary® Terreno di coltura organoide per cancro ovarico (umano) | 41433ES50/60/76 | 50/l00/500 mL |
| Cebrary® Terreno di coltura organoide per cancro al pancreas (umano) | 41434ES50/60/76 | 50/l00/500 mL |
3.Trasfezione efficiente per un'espressione genica di alta qualità
La trasfezione cellulare è una tecnica cruciale nella ricerca biomedica, che consente l'introduzione di acidi nucleici esogeni (come DNA, mRNA, siRNA e miRNA) nelle cellule per l'espressione genica, il silenziamento o studi funzionali. Con diversi tipi di cellule e acidi nucleici, la selezione del reagente di trasfezione giusto è essenziale per esperimenti di successo.
Reagenti di trasfezione chimica, inclusi formulazioni a base di liposomi, PEI e fosfato di calcio, ognuno offre vantaggi unici. Sììì Biology ha sviluppato una linea di prodotti diversificata ottimizzata per varie applicazioni di trasfezione, tra cui la trasfezione ad alta efficienza per DNA, siRNA, miRNA e mRNA, con successo verificato su oltre 40 linee cellulari. Questi reagenti offrono un'elevata efficienza di trasfezione, ampi scenari applicativi e prodotti di grado GMP per la produzione commerciale, garantendo risultati affidabili ed efficaci nella ricerca e nelle applicazioni industriali.
| Numero di gatto | Nome del prodotto | Acido nucleico | Applicazione |
| 40802ES | Il DNA | Reagente di trasfezione liposomiale ad alte prestazioni | |
| 40804ES | Bassa tensione | Migliora la capacità di infezione lentivirale. | |
| 40806ES | siRNA, miRNA, ASO | Reagenti di trasfezione specifici per siRNA e miRNA con elevata efficienza di knockdown. | |
| 40808ES | DNA, siRNA, miRNA | Reagente di trasfezione liposomiale potenziato in grado di eseguire trasfezioni di DNA e RNA in vari tipi di cellule, continuando a mostrare buoni effetti sulle cellule difficili da trasfezionare. | |
| 40809ES | mRNA | Reagente di trasfezione specifico per mRNA con elevata efficienza di trasfezione in diversi tipi di cellule. | |
| 40815ES | Il DNA | Ampiamente applicabile per l'espressione proteica e il confezionamento virale (in polvere). | |
| 40816ES | Hieff Trans®Polietilenimmina lineare (PEI) MW40000(lisi rapida） | Il DNA | |
| 40820ES | Il DNA | Reagenti di trasfezione dedicati per il confezionamento virale, in grado di ottenere rese più elevate per il confezionamento virale AAV e LV | |
| 40821ES | Il DNA | ||
| 40823ES | Il DNA | La più alta efficienza di tranfezione. Particolarmente adatto per la produzione di AAV in coltura in sospensione, con rese più elevate. |
4. Crioconservazione delle cellule per un uso a lungo termine
Il congelamento cellulare è una tecnica cruciale per la conservazione a lungo termine delle cellule, che serve a scopi quali la prevenzione della contaminazione, il mantenimento della coerenza sperimentale, la facilitazione della spedizione e la creazione di banche cellulari. I rischi principali durante il congelamento includono formazione di cristalli di ghiaccio e danni da soluzionePer mitigare questi rischi, è essenziale impiegare protocolli di congelamento lento e scongelamento rapido. I crioprotettori come glicerolo o dimetilsolfossido (DMSO) sono comunemente usati per ridurre la formazione di cristalli di ghiaccio e lo stress osmotico.
Yeasen offre due soluzioni specializzate per la crioconservazione: CellStore Freezing per cellule di mammiferi e Insect Cell Store Freezing per cellule di insetti. Entrambi i prodotti presentano formulazioni uniche che consentono il congelamento diretto a -70°C senza complesse procedure di raffreddamento e forniscono alti tassi di sopravvivenza cellulare dopo lo scongelamento, in particolare per le cellule sensibili al DMSO o che tendono ad agglomerarsi. Queste soluzioni sono prive di componenti sieriche o proteiche, garantendo l'assenza di contaminazione da fonti bovine e sono ideali per colture prive di siero.
| Nome del prodotto | Numero di gatto | Specificazione |
| Congelamento di cellule di mammifero | 40128ES50 | 5×10 ml |
| Congelamento di cellule di mammifero | 40128ES60 | 100 ml |
| Cellula di insetto Conservazione Congelamento | 40129ES50 | 5×10 ml |
| Cellula di insetto Conservazione Congelamento | 40129ES60 | 100 ml |
| Terreno di congelamento cellulare senza siero | 40151ES | 50 ml/100 ml |
| Terreno di congelamento cellulare senza siero (senza DMSO) | 40152ES | 100 ml |
| Terreno di congelamento cellulare senza siero (per cellule staminali) | 40153ES | 100 ml |
| Terreno di congelamento cellulare senza siero (per cellule staminali, senza DMSO) | 40154ES | 100 ml |
5. Prevenire la contaminazione per colture sane
La contaminazione è un problema diffuso nella coltura cellulare, che spesso porta a risultati compromessi e a spreco di tempo di ricerca. Riconoscere i vari tipi di contaminazione è essenziale per una prevenzione e una bonifica efficaci.
Cellula comune contaminanti
- Batteri
- Funghi
- Micoplasma
- Protozoi
- macchie nere
- Virus
- specie incrociata
Le misure preventive includono l'uso di antibiotici, la disinfezione regolare delle attrezzature, l'aderenza a tecniche sterili e il mantenimento di aree di lavoro pulite. In caso di rilevamento di contaminazione, è generalmente consigliabile scartare le colture interessate a meno che non siano rare o di valore; in tali casi, si dovrebbero adottare misure per eliminare il contaminante. Si raccomanda di stabilire linee cellulari di backup o acquisire nuove colture.In determinate situazioni, trattamenti specializzati mirati a specifici contaminanti possono aiutare a ripristinare le colture cellulari. Mantenere un'igiene adeguata, garantire una rigorosa separazione delle attrezzature e mantenere un ambiente sterile sono essenziali per prevenire la contaminazione e garantire il successo degli esperimenti di coltura cellulare.
| Tipo | Nome del prodotto | Numero di gatto | Specificazione |
| Antibatterico | Penicillina-Streptomicina (100×), Adatto per Colture Cellulari | 60162ES76 | 100 ml |
| 60230ES07/60 | 3.2/100 gr | ||
| Sale di solfato di gentamicina | 60214ES03/08/25 | 1/5/25 gr | |
| Metronidazolo | 60223ES25/60 | 25/100 mg | |
| Antimicotico | Amfotericina B | 60238ES01/03 | 100 mg/1 g |
| Nistatina | 60219ES08 | 5 grammi | |
| 60231ES03/08 | 1/5mg | ||
| Rilevamento del micoplasma | 40601ES10/20 | 10/20 analisi | |
| Kit di rilevamento del micoplasma in un unico passaggio MycAway™ Plus-Color | 40612ES25/60 | 25/100 grammi | |
| Rimozione del micoplasma | Il mio viale™ Spray (Pronto all'uso) | 40605ES02/03/08 | 1/2/10×500 ml |
| Il mio viale™ Trattamento (1000×) - Reagente di eliminazione del micoplasma | 40607ES03/08 | 1/5 ml | |
| Il mio viale™ Profilattico (2000×) - Reagente di prevenzione del micoplasma | 40608ES03/08 | 1/5 ml | |
| 40609ES60 | 100 ml | ||
| 40610ES60 | 100 ml |
Conclusione
L'ottimizzazione dei processi di coltura cellulare è fondamentale per produrre risultati affidabili e riproducibili.Dalla selezione degli enzimi giusti per la digestione alla prevenzione della contaminazione, ogni passaggio del flusso di lavoro è importante. Incorporando reagenti e tecniche di alta qualità di Yeasen, puoi ottenere colture cellulari più sane e produttive, che portano a esperimenti e risultati di ricerca più riusciti.
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