La tecnologia di amplificazione isotermica degli acidi nucleici può essere categorizzata in molti tipi in base a diversi principi di amplificazione. Il metodo più comune e ampiamente applicato è la tecnologia Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) sviluppata da studiosi giapponesi tra cui Notomi nel 2000. La caratteristica tecnica di LAMP è la progettazione di quattro primer che prendono di mira sei regioni sul gene bersaglio, utilizzando una DNA polimerasi Bst di tipo strand-displacement per condurre la reazione di amplificazione a una temperatura costante di 60~65°C. Ciò consente di ottenere un 109-1010- amplificazione entro 15-60 minuti.
La DNA polimerasi Bst è l'enzima principale nella tecnologia di amplificazione isotermica LAMP. Possiede una forte stabilità termica, attività di spostamento del filamento e attività polimerasica, consentendo un'amplificazione rapida, efficiente e specifica del modello in condizioni di temperatura costante. A differenza della PCR, che richiede cicli di denaturazione termica per l'amplificazione, l'intero esperimento LAMP può essere completato in un'ora senza la necessità di tali cicli.
Vantaggi del prodotto
Enzima privo di glicerolo, adatto alla liofilizzazione
Trasporto a temperatura ambiente, riduzione dei costi
Forte attività di spostamento del filamento, sensibile e stabile
Reidratazione rapida, facile da usare
Punti salienti delle prestazioni
01 Applicazione del metodo di tintura fluorescente
1、Alta sensibilità e buona specificità
Nel sistema di amplificazione del colorante fluorescente RT-LAMP, le prestazioni di amplificazione della torta di polvere liofilizzata 14405ES sono coerenti con quelle dell'enzima Bst liquido (incluso glicerolo e senza glicerolo), ed entrambi possono rilevare il 100% a una sensibilità di 50 copie/T. La specificità è buona, senza rilevamento in 48 pozzetti di NTC (Negative Template Control).
2、Buona stabilità termica accelerata
Nel sistema di amplificazione del colorante fluorescente RT-LAMP, la polvere liofilizzata è stata sottoposta a trattamenti di conservazione a 45°C per 7 giorni, 45°C per 15 giorni e temperatura ambiente per 19 giorni, rispettivamente. Dopo l'accelerazione termica, le prestazioni del prodotto sono rimaste coerenti con quelle della versione liquida dell'enzima Bst privo di glicerolo e non è stato osservato alcun picco nell'NTC (Negative Template Control).
3、Supporta il ricongelamento dopo l'accelerazione
Nel sistema di amplificazione del colorante fluorescente RT-LAMP, la polvere liofilizzata è stata sottoposta a trattamenti di conservazione a 45°C per 7 giorni e 45°C per 15 giorni, rispettivamente. La polvere liofilizzata dopo il trattamento di accelerazione termica è stata quindi sottoposta a un secondo ciclo di liofilizzazione (inclusi enzima singolo e reagenti RT-LAMP). Gli esperimenti mostrano che dopo il trattamento accelerato e la seconda liofilizzazione, le prestazioni del prodotto rimangono coerenti con quelle della versione liquida dell'enzima Bst privo di glicerolo e non è stato osservato alcun picco nell'NTC (Negative Template Control). La stabilità del prodotto è buona, supportando la liofilizzazione secondaria e l'accelerazione dopo la liofilizzazione secondaria.
02 Applicazione del metodo colorimetrico del pH
1、Alta sensibilità e buona specificità
Nel sistema di amplificazione colorimetrica pH RT-LAMP, la sensibilità di amplificazione della polvere liofilizzata 14405ES può raggiungere 50 copie/T (tasso di rilevamento del 100%) e la specificità è buona, senza rilevamento in 24 pozzetti di NTC (controllo del modello negativo).
2、Buona stabilità termica accelerata
Nel sistema di amplificazione colorimetrica pH RT-LAMP, la stabilità accelerata termicamente della polvere liofilizzata 14405ES è stata studiata a 45°C per 15 giorni, la stabilità dopo liofilizzazione secondaria a seguito di accelerazione (reidratazione dopo accelerazione a 45°C per 7 giorni) e la stabilità di conservazione dopo reidratazione (conservato a -20°C per 7 giorni dopo la reidratazione). Gli esperimenti indicano che il prodotto 14405ES ha una buona stabilità, senza impatto sulle prestazioni del prodotto dopo accelerazione termica, e supporta la liofilizzazione secondaria dopo accelerazione.
Raccomandazioni sui prodotti in evidenza
| Tipo di prodotto | Funzione del prodotto | Nome del prodotto | Numero articolo |
| Miscela RT-LAMP | Colorante fluorescente | Lampada RT Tintura Saggio Kit (UDG) Più) | 13762ES |
| Indicatore di pH | Lampada RT pH Sensibile Colorante Kit | 13906ES | |
| Indicatore di pH liofilizzato | Lampada RT pH Sensibile Tintura Cromogenico Versione Liofilizzato Kit | 13920ES | |
| Enzima Bst | Glicerolo | Prodotti Buon compleanno Più Il DNA Polimerasi (40 U/μL) | 14402ES |
| Senza glicerolo | Liofilizzato Buon compleanno Più Il DNA Polimerasi (60 U/μL, senza glicerolo) | 14405ES | |
| Respingente | Tampone di base (privo di coloranti, ecc.) | 10× Prodotti Buon compleanno Più Il DNA Polimerasi Respingente | 15441ES |