----Sfondo pulito, modelli di bande stabili, dimensioni precise
I marcatori del DNA sono una combinazione di frammenti di DNA con pesi molecolari diversi. Il loro uso principale è quello di co-migrare con il DNA campione nell'elettroforesi su gel di agarosio per separare le molecole di DNA. Confrontando le dimensioni e la luminosità delle bande del campione con quelle del marcatore del DNA, si può stimare approssimativamente il peso molecolare e la concentrazione del DNA campione in soluzione. YEASEN I marcatori del DNA coprono un intervallo di peso molecolare da 100 bp a 15 kb, soddisfacendo le esigenze della maggior parte degli esperimenti.
Caratteristiche del prodotto
- Elevata stabilità, può essere conservato a temperatura ambiente per 3-6 mesi;
- Sfondo pulito, modelli di bande stabili e dimensioni precise;
- Contiene bande di riferimento con concentrazioni note per un facile posizionamento e analisi semiquantitativa;
- Include tampone di caricamento per elettroforesi diretta, comodo e veloce;
- Dotato di un buffer di caricamento 5× per il caricamento dei campioni.
Diagramma dell'elettroforesi
Punti di attenzione
- Metodo di conservazione: Conservazione stabile a temperatura ambiente per 3-6 mesi; per periodi più lunghi, conservare a 4°C o -20°C.
- Il DNA Marker è adatto per l'analisi delle bande di DNA nell'elettroforesi su gel di agarosio e non è raccomandato per l'uso nell'elettroforesi su gel di poliacrilammide.
- Selezione della concentrazione del gel e della soluzione tampone:
| Concentrazione di agarosio | Intervallo di separazione efficace (bp) | Buffer consigliato |
| 0,5% | 2.000-50.000 | 1×TAE |
| 0,8% | 800-10.000 | 1×TAE |
| 1,0% | 400-8.000 | 1×TAE |
| 1,2% | 300-7.000 | 1×TAE |
| 1,5% | 200-3.000 | 1×TAE/0,5×TBE |
| 2,0% | 100-2.000 | 1×TAE/0,5×TBE |
| 3,0% | 25-1.000 | 0,5×TBE |
【Nota】: Per frammenti di grandi dimensioni, scegliere un gel a bassa concentrazione e utilizzare un sistema tampone TAE per l'elettroforesi; per frammenti di piccole dimensioni, scegliere un gel ad alta concentrazione e utilizzare un sistema tampone TBE per l'elettroforesi.
- Selezione di coloranti di acidi nucleici:
L'EB (bromuro di etidio) è un colorante fluorescente altamente sensibile con una lunghezza d'onda di eccitazione massima di 302 nm, che può essere utilizzato per osservare gli acidi nucleici nei gel di agarosio e poliacrilammide. L'EB si intercala con le basi negli acidi nucleici ed è noto per essere tossico.
YeaRed (Cat#10202ES76) e YeaGreen (Cat#10204ES76) sono nuovi coloranti di acidi nucleici non tossici con una struttura molecolare oleosa unica che non riesce a penetrare le membrane cellulari per entrare nelle cellule, non è facilmente volatile o sublimabile e quindi non viene inalato dagli esseri umani, garantendo la sicurezza dello sperimentatore.I risultati dei test di Ames mostrano anche che YeaRed e YeaGreen non hanno mutagenicità alle concentrazioni di colorazione del gel, il che li rende un'alternativa sicura e non tossica all'EB altamente cancerogeno. Inoltre, YeaRed ha le stesse caratteristiche spettrali di EB, quindi può sostituire perfettamente EB senza cambiare il sistema di imaging esistente.
Domande e risposte
D1: Perché le bande ad alto peso molecolare del marcatore del DNA si trascinano e non si separano bene?
A1: Il colorante dell'acido nucleico non si lega sufficientemente al DNA Marker. Poiché le bande ad alto peso molecolare richiedono più colorante dell'acido nucleico, se il colorante non è saturo, le bande ad alto peso molecolare sono più suscettibili agli effetti di migrazione, con conseguente trascinamento e scarsa separazione. Si consiglia di ridurre la quantità di DNA Marker utilizzata (può essere diluita con acqua 5 volte e quindi possono essere caricati 8-10 μL) o di aumentare la concentrazione del colorante dell'acido nucleico.
D2: Perché non ci sono bande o bande deboli nel DNA?
A2:
- Caricamento del DNA insufficiente, aumentare la quantità caricata;
- La banda di DNA è uscita dal gel;
- La banda del DNA è oscurata dal colorante di tracciamento;
- Il colorante dell'acido nucleico non è stato aggiunto al gel;
- Il gel di agarosio è rimasto troppo a lungo, si consiglia di prepararlo e utilizzarlo immediatamente.
D3: Perché le bande marcatrici del DNA sono diffuse?
A3:
- Degradazione parziale del DNA, verificare che le condizioni di conservazione non siano troppo calde;
- La tensione durante l'elettroforesi è troppo bassa, causando la diffusione delle bande di DNA. Si consiglia di far funzionare il gel a 110 V-130 E per più di 45 min;
- La concentrazione del gel di agarosio non è appropriata, preparare secondo la concentrazione del gel consigliata nel manuale;
- La qualità del gel di agarosio è scarsa, si consiglia di prepararne uno nuovo.
D4: Perché le bande campione sembrano avere dimensioni diverse rispetto alle bande marcatrici del DNA?
A4:
- La migrazione del DNA non è correlata solo alle dimensioni effettive, ma anche al fatto che sia combinata con proteine, stato ionico, struttura del DNA, gel e altri fattori. La velocità di migrazione elettroforetica degli acidi nucleici è correlata al rapporto DNA/colorante e quando la quantità di colorante dell'acido nucleico è insufficiente, può portare a errori di velocità di migrazione maggiori;
- Se il campione contiene un'elevata concentrazione di ioni di sale, può anche causare errori di migrazione significativi;
- Se la quantità di campione caricata differisce in modo significativo dalla quantità di bande marcatrici del DNA o se i volumi differiscono in modo significativo, possono verificarsi anche errori di migrazione più grandi.
Informazioni per l'ordinazione
| Orientamento al prodotto | Nome del prodotto | Numero di prodotto | Specifiche |
| Marcatore del DNA | Marcatore DNA GoldBand DL2000 | 10501ES60/80 | 100 T/10×100 T |
| Marcatore DNA GoldBand DL5000 | 10504ES60/80 | 100 T/10×100 T | |
| Scala del DNA GoldBand 100bp | 10507ES60/80 | 100 T/10×100 T | |
| Scala del DNA GoldBand da 1 kb | 10510ES60/80 | 100 T/10×100 T |