CiaoAzione™ Citochine convalidate in organoidi coltivati

Nel 2021, gli organoidi saranno elencati come progetto chiave del piano nazionale di ricerca e sviluppo "14th Five-Year Plan". Gli organoidi sono così interessanti e anche il modo per ottenerli è diventato il fulcro dell'attenzione. Diversi organoidi richiedono citochine diverse durante la coltura. Aggiungendo citochine che promuovono o inibiscono specifici percorsi di segnalazione, le cellule staminali possono essere indotte a differenziarsi negli organoidi desiderati. Il protocollo di coltura di citochine più classico nella coltura di organoidi è WNER (rispettivamente: Wnt-3a, Noggin, EGF e R-Spondins) e la combinazione di aumento o diminuzione di questi 4 fattori può essere applicata a quasi tutti gli esperimenti di coltura di organoidi.

Citochine comunemente utilizzate nella coltura degli organoidi

R-Spodina 1

Funzione: R-Spodin 1 appartiene alla famiglia Rspo dei regolatori Wnt, che comprende 4 membri, vale a dire Rspo1-4. Questa famiglia è un fattore microambientale che mantiene le cellule staminali adulte in più organi. RSPO1 è una proteina attivatrice secreta. Rspo-1 è espressa in alcune regioni del sistema nervoso centrale in via di sviluppo e si trova anche nella ghiandola surrenale, nell'ovaio, nel testicolo, nella tiroide e nella trachea.

Come attivatore del pathway di segnalazione Wnt, Rspo1 svolge un ruolo in molti aspetti migliorando la segnalazione Wnt. È un terreno di coltura comunemente utilizzato per organoidi epiteliali gastrici, organoidi dell'intestino tenue e del colon, organoidi del fegato, organoidi della prostata, organoidi del pancreas e organoidi del seno. fattore.

Wnt-3a

Funzione: Wnt-3a appartiene alla famiglia di proteine ​​di segnalazione Wnt e svolge un ruolo importante nel mantenimento dell'integrità dei tessuti embrionali e adulti. La famiglia Wnt è altamente conservata e ricca di cisteina. Le Wnt mediano il pathway di segnalazione Wnt legandosi ai recettori della membrana cellulare e/o legandosi ai recettori della membrana cellulare adiacenti. Il pathway di segnalazione Wnt può essere suddiviso in pathway canonico e pathway non canonico, uno è coinvolto nel pathway di segnalazione canonico mediato dalla β-catenina, inclusi Wnt1, Wnt2, Wnt2b, Wnt3, Wnt3a, Wnt7a, Wnt8, Wnt8b e Wnt10a; l'altro non è Pathways di segnalazione non canonici dipendenti dalla β-catenina, inclusi Wnt4, Wnt5a, Wnt6 e Wnt11. Essendo la proteina di segnalazione più rappresentativa della famiglia Wnt, Wnt3a è ampiamente distribuita e svolge un ruolo chiave nella regolazione delle funzioni cellulari pleiotropiche, tra cui l'auto-rinnovamento, la proliferazione, la differenziazione e la motilità.

EGF

Funzione: L'EGF è un potente fattore di crescita che stimola lo sviluppo epiteliale multiplo, l'angiogenesi, l'inibizione della secrezione di acido gastrico, la proliferazione dei fibroblasti e la formazione di colonie di cellule epidermiche in coltura. L'EGF è un membro fondatore della famiglia EGF, che include anche TGF-α, due proteine ​​regolatrici (AR), proteina delle cellule β (BTC), proteina epidermica (EPR), fattore di crescita simile all'EGF legante l'eparina (HB-EGF), epiproteine ​​e neureguline (NRG1-6). Fisiologicamente, l'EGF esiste in vari fluidi corporei, tra cui sangue, latte, urina, saliva, sperma, succo pancreatico, liquido cerebrospinale e liquido amniotico. L'EGF è un ligando ad alta affinità per il recettore dell'EGF (ErbB). L'EGF si lega e induce la dimerizzazione del recettore EGF, portando all'attivazione del percorso di segnalazione della proteina tirosin-chinasi, trasducendo così il segnale della famiglia EGF.

Testa di zucca

Funzione: Noggin può inibire i ligandi della famiglia TGF-β e impedire loro di legarsi ai recettori corrispondenti.Noggin è stato originariamente scoperto come antagonista di BMP-4 e poi è stato dimostrato che modula l'attività di altre BMP (BMP-2, 7, 13 e 14). Noggin è altamente conservato tra i vertebrati. Le proteine ​​Noggin secrete regolano l'attività delle proteine ​​morfogenetiche ossee durante lo sviluppo. Ruolo dell'antagonista della segnalazione BMP Noggin nello sviluppo di metastasi ossee osteolitiche da cancro alla prostata.

bFGF/FGF-2

Funzione: bFGF, un membro della superfamiglia FGF di proteine ​​mitogeniche. È un fattore chemiotattico e mitogenico altamente specifico per molti tipi di cellule e sembra essere coinvolto nel rimodellamento dei tessuti danneggiati come la guarigione delle ulcere, la riparazione vascolare, il trauma cranico. bFGF è un componente importante del terreno di coltura delle cellule staminali embrionali umane. Inoltre, la proteina bFGF è una proteina cationica legante l'eparina coinvolta in varie condizioni patologiche, tra cui l'angiogenesi e la crescita di tumori solidi. Pertanto, bFGF è considerato un bersaglio per la chemioprevenzione del cancro e le strategie terapeutiche. bFGF è spesso utilizzato come componente importante del terreno di coltura cellulare, come il terreno di coltura delle cellule staminali embrionali umane, sistema di coltura senza siero.

FGF-10

Funzione: Il fattore di crescita dei fibroblasti 10 (FGF-10) è un fattore di crescita legante l'eparina che appartiene alla famiglia FGF. Le proteine ​​di questa famiglia svolgono un ruolo centrale nello sviluppo prenatale, nella crescita postnatale e nella rigenerazione di vari tessuti promuovendo la proliferazione e la differenziazione cellulare. FGF-10 è secreto dalle cellule mesenchimali e si lega a FGF-BP extracellulare, FGF-10 si lega preferenzialmente e attiva FGF R2 epiteliale (IIIb) e interagisce debolmente con FGF R1 (IIIb).

Qsistema di gestione della qualità Di CiaoAzione™ citochina

Sistema di gestione della qualità

• Certificate ISO 13485:2016, le citochine vengono prodotte attraverso un processo di produzione ultra-pulito completamente chiuso per garantire la pulizia e la stabilità delle proteine.
• Rispettare il sistema di "Buone pratiche di fabbricazione dei farmaci"
• Avere un Certificato di Approvazione della Qualità (COA)
• Tecnologia asettica e filtrazione di sterilizzazione secondaria
• Base di produzione di materie prime per prodotti farmaceutici

Gestione della garanzia della qualità

• Una persona speciale è responsabile del sistema di formazione del personale dirigente
• Stabilire procedure di manutenzione e calibrazione delle apparecchiature
• Sistema di gestione delle materie prime e dei fornitori
• Registrazioni complete di produzione dei lotti, registrazioni di ispezione dei lotti, registrazioni di imballaggio, ecc.
• I registri dei documenti di qualità sono stati verificati e ispezionati dal QA
• Registri completi di produzione e ispezione dei lotti
• Validazione dei metodi analitici

Sistema di controllo qualità

• Rispettare la terza regola generale dell'edizione 2020 della Farmacopea della Repubblica Popolare Cinese: controllo di qualità delle materie prime e degli eccipienti per la produzione di prodotti biologici

Validazione della coltura organoide

Sììì Le citochine sono state verificate su organoidi tumorali umani come quelli del cancro ai polmoni, della cervice, delle ovaie, del pancreas e dell'intestino, e su organoidi normali come gli organoidi dell'intestino tenue umano e di topo.

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