L'elettroforesi proteica è una tecnica di analisi delle proteine. Le proteine ​​sono caricate negativamente o positivamente in un tampone e si spostano verso l'anodo in un campo elettrico chiamato elettroforesi. Diverse molecole proteiche hanno diverse mobilità elettroforetiche. Una parte molto importante dell'elettroforesi proteica è la preparazione del gel. La preparazione convenzionale del gel richiede spesso diverse ore e ci sono anche problemi come perdite di liquido, gel irregolare e bolle d'aria. Oltre al problema della preparazione, i reagenti delle materie prime avranno anche una certa tossicità, che danneggerà il corpo del distributore di colla e l'aspetto della colla prefabbricata può risolvere questi problemi. Quindi qual è il principio di base dell'elettroforesi proteica e qual è la funzione e il principio del gel prefabbricato?

1. Qual è il principio di base dell'elettroforesi proteica?
2. Qual è la funzione e il principio della colla prefabbricata?
3. Introduzione della colla prefabbricata fornita da Yeasen
4. Domande frequenti
5. Dettagli del prodotto

1. Qual è il principio di base dell'elettroforesi proteica?

La maggior parte delle macromolecole biologiche, come proteine ​​e acidi nucleici, hanno gruppi cationici e anionici, che sono chiamati zwitterioni. Il metodo di elettroforesi zonale in cui le particelle sono disperse nella soluzione e il gel di amido, agar o gel di agarosio, gel di poliacrilammide, ecc. come mezzo di supporto è chiamato elettroforesi su gel. L'elettroforesi su gel di poliacrilammide è un metodo di elettroforesi in cui il supporto è un gel di poliacrilammide. Si ritiene che la dimensione della dimensione dei pori del gel di poliacrilammide sia controllata per polimerizzare e le proteine ​​sono separate dall'azione di un setaccio molecolare simile.

L'elettroforesi proteica comprende due forme, l'elettroforesi su gel di poliacrilammide nativo (Native-PAGE) e l'elettroforesi su gel di poliacrilammide con sodio dodecil solfato (SDS-PAGE). Native-PAGE mantiene intatte le proteine ​​durante l'elettroforesi e le separa in un gradiente basato sul loro peso molecolare, forma e carica di accompagnamento. D'altra parte, SDS-PAGE separa le proteine ​​in base al peso molecolare delle loro subunità. SDS è un detergente anionico. Come agente denaturante e solubilizzante, può rompere i legami idrogeno intramolecolari e intermolecolari, piegare le molecole e distruggere le strutture secondarie e terziarie delle molecole proteiche. Come forte agente riducente, il mercaptoetanolo, ditiotreitolo, può rompere i legami disolfuro tra i residui di cisteina. Dopo aver aggiunto l'agente riducente e l'SDS al campione e al gel, le molecole vengono depolimerizzate in catene polipeptidiche e le catene laterali degli amminoacidi depolimerizzati e l'SDS vengono combinate in micelle proteina-SDS. La carica negativa delle micelle proteina-SDS supera la carica originale della proteina, eliminando la differenza di carica e la differenza strutturale tra molecole diverse. La mobilità della proteina dipende solo dalla massa molecolare della proteina e la massa molecolare della proteina può essere determinata confrontandola con uno standard di massa molecolare nota.

2. Qual è la funzione e il principio della colla prefabbricata?

Rispetto ai tradizionali gel realizzati a mano, i gel proteici prefabbricati può evitare il contatto con un gran numero di reagenti tossici, far risparmiare molto tempo e risolvere efficacemente il problema delle grandi differenze nei gel realizzati a mano.

Il gel è costituito da due diversi strati di gel, lo strato superiore è un gel di impilamento e lo strato inferiore è un gel di separazione. Il gel di impilamento è anche noto come gel di impilamento.La concentrazione del gel è relativamente piccola e la dimensione dei pori è relativamente grande. Il campione viene aggiunto al gel di impilamento e concentrato in una zona stretta tramite la migrazione del gel con grandi dimensioni dei pori. Il gel di separazione, noto anche come gel di elettroforesi, di solito ha una piccola dimensione dei pori e la selezione della concentrazione di gel appropriata può rendere i componenti del campione ben separati.

I gel di separazione possono essere suddivisi in gel fissi e gel a gradiente. La concentrazione di poliacrilammide è 8%, 10%, 12%, 15%, 4% al 12% e 4% al 20%. I primi quattro sono gel prefabbricati con una concentrazione fissa e gli ultimi due sono gel a gradiente. Le concentrazioni rappresentano l'intervallo di pesi molecolari delle proteine ​​isolate. I gradienti di gel sono formati da miscelatori a gradiente. Una soluzione di acrilammide ad alta concentrazione viene aggiunta alla lastra di vetro, quindi la concentrazione della soluzione diminuisce in un gradiente e la dimensione dei pori del gel è più grande nella parte superiore e più piccola nella parte inferiore. Il gel fissativo può separare solo le proteine ​​entro il suo intervallo di separazione, né troppo grande né troppo piccolo. I gel a gradiente non hanno questa limitazione, dove le molecole grandi vengono separate nella parte superiore e le molecole piccole vengono separate nella parte inferiore. Poiché la dimensione dei pori del gel a gradiente diventa gradualmente più piccola, ha un effetto di concentrazione sulla proteina vicino alla dimensione dei pori che la proteina non può penetrare, quindi si formerà una zona molto stretta dopo l'elettroforesi. Le proteine ​​con piccole differenze di peso molecolare spesso non possono essere separate su gel fissi ma possono essere risolte su gel a gradiente.

3. Introduzione della colla prefabbricata fornita da Yeasen

SÌ ... Gel proteico prefabbricato Plus contiene concentrazione a gradiente e concentrazione fissa, una varietà di concentrazioni diverse può soddisfare le esigenze di diverse elettroforesi proteiche. È preparato da un esclusivo processo di preparazione del gel e ha un eccellente effetto elettroforetico. È compatibile con tutti i tipi di serbatoi per elettroforesi sul mercato (Bio-RAD, Tanon, Life, ecc.) e ha i vantaggi di ampia adattabilità, alta risoluzione, alta stabilità, bande chiare e uniformi, ecc.

3.1 ANNO Gel proteico prefabbricato Plus Passa a una tavola di plastica, di qualità migliore!

Facile da usare: pronto all'uso; strappare il nastro adesivo dal fondo della tavola di plastica

Ampia gamma di applicazioni: compatibile con proteine ​​denaturate e proteine ​​naturali

Banda chiara: il trattamento speciale delle piastre di plastica riduce notevolmente l'assorbimento delle proteine

Risparmio di tempo: l'esperimento può essere completato in 18 minuti al massimo

Garanzia di qualità: rigorosa garanzia di stabilità inter-lotto

Lunga conservazione: può essere conservato a 4℃ per 12 mesi

3.2 I seguenti parametri possono aiutarti a scegliere la serie di gel appropriata

Sistema tampone per elettroforesi: tampone di corsa proteico denaturato o tampone di corsa proteico naturale

Numero di pozzetti e caricamento del campione: 10 o 15 pozzetti, la dimensione massima del campione era rispettivamente di 70 μL e 40 μL

concentrazione del gel: 8%, 10%, 12%, 15%, 4%-12%, 4%-20%

Tabella 1.Concentrazione del gel e intervallo di separazione lineare

3.3 I dati mostrano

Figura 1. I dati mostrano

Figura 2. I dati mostrano

4. Domande frequenti

Q1: Il prefabbricato deve gel essere posizionato a 4℃? Ha importanza se lo lasci a temperatura ambiente per un po'?

UN: Consigliato 4℃, può essere conservato per 12 mesi. Non conservare sotto 0℃, può essere conservato a temperatura ambiente (25℃) per 30 giorni.

D2: Come scegliere tra concentrazione a gradiente e concentrazione fissa? Qual è il peso molecolare minimo della proteina separata da precast gel?

A: La dimensione della separazione delle proteine ​​da parte del prefabbricato gel è correlato alla sua concentrazione e l'intervallo di separazione corrispondente è mostrato nella figura sopra.

Prefabbricati a concentrazione fissa gel ha una risoluzione migliore. Concentrazione del gradiente prefabbricata gel ha una gamma di separazione più ampia e una gamma più ampia di applicazioni; Clienti dovrebbero scegliere la concentrazione appropriata in base alle proprie esigenze.

Il nostro prefabbricato con pendenza del 4%-20% gel (Cat#36250, Cat#36256) ha un ampio intervallo di separazione per proteine ​​fino a 3,5 kDa.

Figura 3. Prefabbricato a gradiente dati del gel

D3: Il prefabbricato gel devono essere equipaggiati con il tuo buffer speciale? Puoi realizzare il tuo buffer?

A: Buffer speciale YEASEN (Cat#36236, Cat#36237) e prefabbricato l'applicabilità del gel è migliore. Non mescolare con altri buffer. Il buffer può essere preparato acquistando reagenti, ma i clienti è necessario utilizzare la nostra formula, che può essere trovata nel prefabbricato pertinente istruzioni per il gel.

D4: Come distinguere il gel di separazione e gel concentrato? È necessario per l'elettroforesi a tensione sezionale?

A: I due componenti sono gli stessi, ma la concentrazione non è la stessa, l'occhio nudo non può distinguerli; l'altezza della colla concentrata è di 1,5 cm.

No, si raccomanda l'elettroforesi a 150 V e per completare l'esperimento sono necessari 30-40 minuti.

D5: Il tuo prefabbricato è gel adatto a tutti i tipi di vasche per elettroforesi presenti sul mercato?

A: Sì, il nostro prefabbricato gel è adatto a tutti i tipi di vasche per elettroforesi presenti sul mercato,

Bio-rad Mini-Protean (II/3 /Tetra System) e Tanon VE180 (notare l'assemblaggio inverso della striscia di tenuta);

Life Technology Novex Mini-cell (utilizzata con deflettore speciale);

Altra larghezza della piastra di gel in vasca di elettroforesi da 10 cm.

5. Dettagli del prodotto

I prodotti forniti da Yeasen sono i seguenti:

Tabella 2.Dettagli del prodotto