—Illumina la membrana del tuo blot, a portata di mano!
I reagenti ECL, noti come substrati chemiluminescenti per la perossidasi di rafano (HRP), sono attualmente i reagenti più sensibili utilizzati nella rilevazione del Western blotting. I problemi comuni con i reagenti ECL sul mercato includono quenching, elevato background, instabilità e difficoltà nel rilevare proteine a bassa abbondanza, che possono influenzare i risultati sperimentali finali.
Yeasen Biotech ha riunito ricercatori scientifici di eccellenza nel campo dell'immunodetection. Controllando rigorosamente la qualità delle materie prime di luminol e migliorando costantemente la formulazione di potenziatori e stabilizzatori, abbiamo sviluppato quattro tipi di reagenti ECL per soddisfare le esigenze di diversi esperimenti. Questi includono prodotti potenziati, ultrasensibili, durevoli e ad altissima sensibilità. Non solo soddisfano i requisiti di rilevamento per proteine target da bassa ad alta abbondanza, ma migliorano anche l'intensità della luminescenza senza influenzare l'esperimento, con conseguenti immagini più nitide.
Caratteristiche del prodotto
- Sensibilità superba — Rilevamento di antigeni da livelli di picogrammi a bassi femtogrammi.
- Rapporto segnale/rumore più elevato — I substrati luminescenti precisi riducono il rumore di fondo.
- Più efficiente in termini di anticorpi — Sistemi di substrato ottimizzati per una maggiore affinità di legame degli anticorpi.
- Elevato rapporto costo-prestazioni — Prestazioni più elevate a un prezzo più basso.
- Ottima stabilità — I nuovi ossidanti garantiscono una conservazione stabile a 4°C fino a un anno.
Principio del prodotto
Il principio fondamentale del rilevamento del reagente ECL è la luminescenza dalle reazioni di ossidazione: il luminolo, il componente principale del substrato luminescente, viene ossidato da H2O2 in condizioni alcaline tramite la catalisi della perossidasi di rafano (HRP), formando un intermedio di stato eccitato dell'acido 3-ammino-ftalico. Quando ritorna allo stato fondamentale, vengono emessi fotoni, con una lunghezza d'onda di emissione massima di 425 nm. Questi segnali di fotoni possono essere catturati da pellicola a raggi X o dispositivi di imaging CCD.
Guida alla selezione
Yeasen offre attualmente quattro tipi di prodotti ECL, ciascuno con le sue caratteristiche uniche, per soddisfare pienamente le esigenze delle applicazioni di immunoblotting degli utenti.
Quindi, quale prodotto dovresti scegliere per il tuo esperimento?
Tabella 1.Guida alla selezione dei reagenti ECL
| Sììì | ECL migliorato Tipo migliorato | Super ECL Tipo ultra-sensibile | SuperDura Tipo durevole | MaxiSegnale Tipo di sensibilità ultra elevata |
| Campioni applicabili | Target con campioni proteici di routine ad alta abbondanza | Target con bassa abbondanza, campioni limitati | Target con bassa abbondanza, campioni limitati | Obiettivo con abbondanza estremamente bassa, campioni preziosi |
| Sensibilità di rilevamento | Livello medio del picogramma | Basso livello di picogrammi | Livello femtogramma medio | Basso livello di femtogramma |
| Durata del segnale | < 2 ore | < 12 ore | < 24 ore | < 8 ore |
| Sistema di rilevamento applicabile | Tutti i reagenti sono adatti per pellicole radiografiche, dispositivi di imaging CCD | |||
| Concentrazione di diluizione dell'anticorpo primario | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10.000 | 1:1000-1:50.000 | 1:5000-1:100.000 |
| Concentrazione di diluizione dell'anticorpo secondario | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10.000
| 1:50.000-1:250.000 | 1:100.000-1:500.000 |
| Membrana consigliata | Membrana NC | Membrana NC o membrana PVDF | Membrana NC o membrana PVDF | Membrana NC o membrana PVDF |
| Stabilità di stoccaggio | Temperatura ambiente per 1 anno | 4°C per 1 anno, temperatura ambiente per sei mesi | ||
| Vantaggi | Segnale più forte tra lo stesso livello di sensibilità | Rapporto costo-prestazioni più elevato, adatto alla maggior parte degli esperimenti WB | Durata del segnale più lunga, estremamente adatta per esposizioni multiple | Eccellente sensibilità, estremamente adatto per il rilevamento di tracce di proteine |
Nota: la concentrazione di diluizione dell'anticorpo consigliata si basa su una concentrazione di anticorpi di 1 mg/mL.
Applicazione del prodotto
I reagenti ECL di Yeasen hanno effetti d'uso migliori rispetto ai prodotti di altre marche dello stesso livello.
Figura 1. Confronto degli effetti di rilevamento tra il substrato ultrasensibile Yeasen ECL Super e il substrato equivalente Pico del marchio T.
Figura 2. Confronto degli effetti di rilevamento tra il substrato ad altissima sensibilità Yeasen ECL MaxiSignal e il substrato equivalente di altre marche West Femto.
Figura 3.Confronto degli effetti di rilevamento tra Yeasen ECL Durable Substrate SuperDura e il substrato equivalente di altre marche West Dura.
Letteratura pubblicata
[1]Wang Z, Lu Z, Lin S, et al. Le cellule B che esprimono la leucina-tRNA-sintasi-2 contribuiscono all'immunoevasione del cancro del colon-retto. Immunità. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)
[2] Wu Z, Liu D, Pan D, et al. Struttura e ingegneria del miniatura Acidobacillus sulfuroxidans Cas12f1[J].Nature Catalysis, 2023, 6(8):695-709.DOI:10.1038/s41929-023-00995-4(IF:38)
[3] Yao J, Wu D, Zhang C, et al. Macrophage IRX3 promuove l'obesità indotta dalla dieta e l'infiammazione metabolica. Nat Immunol. 2021;22(10):1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y (IF:25.606)
[4] He X, Li J, Zhou G, et al. Controllo dei ritmi e della memoria ippocampali mediante plasticità sinaptica nei neuroni interneuronali inibitori. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)
Vantaggio di prezzo
Figura 7.Confronto dei prezzi dei prodotti Yeasen ECL con i prodotti di altre marche allo stesso livello
Domande frequenti
| Problemi riscontrati | Analisi delle cause | Soluzioni consigliate |
| Il film ha immagini invertite | Il film ha immagini invertite | Il film ha immagini invertite |
| La pellicola presenta bande marroni o gialle | ||
| Spegnimento della fluorescenza | Il tempo di funzionamento è troppo lungo, la membrana si asciuga gradualmente | Impedisce alla membrana di seccarsi |
| Contaminazione di pellicola di plastica, sviluppatore o fissatore | Sviluppare buone abitudini sperimentali | |
| HRP insufficiente nel sistema di reazione | Aumentare il materiale etichettato HRP | |
| Nessuna banda o segnale debole sulla pellicola | Bassa efficienza di trasferimento | Migliorare l'efficienza del trasferimento, utilizzare il marcatore precolorato per il giudizio |
| Antigene/anticorpo insufficiente o non corrispondente | Aumentare la quantità di antigene/anticorpo o selezionare l'antigene/anticorpo appropriato | |
| Problemi con la pellicola radiografica | Se la pellicola radiografica è completamente nera (non trasparente) dopo l'esposizione, significa che è completamente esposta; utilizzare una nuova pellicola radiografica. | |
| Problemi dello sviluppatore/correttore | Pre-esporre una pellicola per controllare; se ci sono problemi, sostituirla con un nuovo sviluppatore/fissatore | |
| HRP eccessivo nel sistema di reazione | Diluire il materiale marcato con HRP | |
| Background elevato | Concentrazioni di anticorpi primari e secondari troppo elevate | Ridurre la concentrazione di anticorpi, estendere il tempo di blocco |
| Anticorpi non puliti a fondo | Aumentare il numero di lavaggi | |
| Blocco incompleto | Ottimizzare le condizioni di blocco | |
| È stato utilizzato un agente bloccante sbagliato | Utilizzare un agente bloccante diverso | |
| Sovraesposizione | Ridurre il tempo di esposizione | |
| Scarsa specificità degli anticorpi | Sostituire con anticorpi di alta qualità | |
| HRP eccessivo nel sistema di reazione | Diluire il materiale marcato con HRP | |
| Bande con spazi vuoti | Elevata concentrazione di antigene e anticorpo secondario | Diluire il campione e rianalizzare il gel, oppure raffreddare la soluzione cromogenica miscelata e applicarla sulla membrana per uno sviluppo rapido immediato. |
| Forma di banda irregolare | Bolle d'aria durante il trasferimento o idratazione non uniforme con metanolo (per membrane PVDF) | Ottimizzare le condizioni di trasferimento. |
| Spot cinematografici | Aggregati di materiale etichettato HRP | Filtrare il materiale marcato HRP con una membrana da 0,2 μm |
| Bande non specifiche | HRP eccessivo nel sistema di reazione | Diluire il materiale marcato con HRP |
| SDS che causa legame proteico non specifico | Non utilizzare SDS nella procedura sperimentale | |
| Scarsa specificità degli anticorpi | Sostituire con anticorpi di alta qualità | |
| Blocco inadeguato | Aumentare il tempo di blocco o utilizzare un agente bloccante diverso |
Informazioni per l'ordinazione
| Nome del prodotto | Numero di prodotto | Specificazione |
| Reagente di rilevamento Super ECL | 36208ES60/76 | 100 ml/50 ml |
| Kit substrato chemiluminescente ECL migliorato | 36222ES60/76 | 100 ml/500 ml |
| Substrato SuperSignal SuperDura Extended Duration | 36223ES10/60/70/76 | 10 ml/100 ml/200 ml/500 ml |
| SuperSignal MaxiSignal Substrato di massima sensibilità | 36224ES10/60/70/76 | 10 ml/100 ml/200 ml/500 ml |