Per offrire più opzioni di trattamento ai pazienti diabetici, all'inizio del XXI secolo sono emersi alcuni nuovi farmaci per il diabete, come gli analoghi del peptide-1 simile al glucagone (GLP-1). Semaglutide, come uno dei farmaci rappresentativi degli analoghi del GLP-1, ha dimostrato in molteplici studi clinici di controllare efficacemente la glicemia se combinato con diversi farmaci ipoglicemizzanti orali e può aiutare i pazienti a perdere peso, ridurre la pressione sistolica e migliorare la funzionalità delle cellule β pancreatiche. Le sue tre formulazioni (iniezione ipoglicemizzante Ozempic, farmaco ipoglicemizzante orale Rybelsus e iniezione per la perdita di peso Wegovy) hanno superato i 20 miliardi di dollari di vendite nel 2023. Grazie alle sue eccezionali prestazioni in riduzione della glicemia e perdita di peso, il settore si aspetta che Semaglutide mantenga un forte slancio di vendita per qualche tempo, spingendo molte aziende a competere per il layout!

La struttura della catena principale di Semaglutide è un polipeptide intermedio di 29 aminoacidi Arg34GLP-1(9-37) o un polipeptide intermedio di 27 aminoacidi Arg34GLP-1(11-37). La produzione e la fabbricazione di questo polipeptide intermedio includono principalmente metodi di sintesi chimica e biopreparazione. Rispetto alla sintesi chimica, la biopreparazione ha superato il collo di bottiglia della capacità ed è più adatta per la produzione continua su larga scala, il che può ridurre ulteriormente i costi di produzione e apportare vantaggi economici più significativi.

Tabella 1. Esempi di metodi di biopreparazione per polipeptidi intermedi di semaglutide

	Metodo di biopreparazione (esempio 1)	Metodo di biopreparazione (esempio 2)
Sintesi genica	Sintetizzare una sequenza proteica di fusione, comprendente un peptide di fusione, un sito di scissione dell'enterochinasi e la sequenza della molecola principale bersaglio	Sintetizzare una sequenza di espressione tandem con la sequenza del gene GLP-1(9-37)
Ingegneria dei batteri Costruzione	Introdurre nell'Escherichia coli per costruire batteri ingegnerizzati ricombinanti	Introdurre nell'Escherichia coli per costruire batteri ingegnerizzati ricombinanti
Espressione della proteina di fusione	Ottimizzando la sequenza del peptide di fusione, modificando il punto isoelettrico e l'idrofilia della proteina, ecc., l'espressione della proteina di fusione viene effettivamente aumentata	Dopo l'induzione della fermentazione ad alta densità, si ottiene una proteina del corpo di inclusione con espressione tandem che esprime GLP-1(9-37) e il ripiegamento produce una proteina solubile
Acquisizione di peptidi intermedi	Dopo che la proteina di fusione subisce la scissione dell'enterochinasi, la purificazione e altri passaggi, è possibile ottenere il polipeptide intermedio semaglutide Arg34GLP-1(9-37)	La proteina solubile può essere ottenuta dopo aver subito una scissione enzimatica in due fasi con l'enzima Kex2 e la carbossipeptidasi B e fasi di purificazione, per ottenere il polipeptide intermedio semaglutide GLP-1(9-37)

L'enterochinasi o enzima Kex2 combinato con la carbossipeptidasi B è un enzima chiave per la catena peptidica principale della semaglutide (metodo di biopreparazione); l'effetto di taglio dell'enzima e il costo sono fondamentali per la produzione.Yisheng Biology si impegna a fornire materie prime enzimatiche stabili per le aziende farmaceutiche, offrendo enzimi di alta qualità e standard di controllo qualità completi per aiutare i clienti a migliorare la capacità di produzione e la stabilità dei lotti, ridurre i costi e immettere rapidamente il mercato.

Sììì soluzione globale per Semaglutide

1.Enterochinasi ricombinante

Enterochinasi ricombinante (rEK) è una subunità della catena leggera dell'enterochinasi intestinale bovina ad alta purezza, che ha la stessa attività enzimatica di taglio specifica dell'enterochinasi estratta naturalmente, con un sito di taglio di Asp-Asp-Asp-Asp-Lys, in grado di rimuovere la proteina di fusione situata all'N-terminale della proteina per rimuovere i tag di fusione non necessari, ed è una proteasi comunemente scelta per la fusione N-terminale. Ha un basso livello di taglio irregolare su altri residui.

Attualmente Yisheng offre ai clienti enterochinasi ricombinanti provenienti da diverse fonti, di diversa qualità e con o senza etichetta His tra cui scegliere.

Yeasen ricombinante Bovino Enterokinase, His, espresso nel lievito è un'enterokinasi bovina ad alta purezza, alta attività e altamente specifica espressa dalla secrezione di Pichia pastoris. Può scindere efficacemente le proteine ​​di fusione in un ampio intervallo di pH (4,5-9,5) e un ampio intervallo di temperatura, e ha ancora attività parziale sotto vari detergenti e denaturanti. Questo prodotto ha un tag His, che può essere facilmente rimosso tramite Ni²⁺ colonna di affinità dopo la reazione di taglio, semplificando notevolmente il successivo processo di purificazione.

Caratteristiche

Elevata specificità: Una proteasi specifica che taglia l'estremità carbossilica della lisina contenente quattro acidi aspartici: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys;

Elevata purezza: Nessuna altra proteasi, nessun taglio non specifico;

Nessuna origine animale: Produzione ricombinante, nessuna contaminazione virale esogena, nessun utilizzo di materie prime di origine animale nel processo produttivo;

Qualità stabile: La produzione in lotti può garantire una produzione in lotti stabile e continua; nessuna differenza da lotto a lotto, qualità stabile;

Capacità sufficiente: Un fermentatore da 500 litri può ottenere ~50 MU di enterochinasi; Yeasen dispone di fermentatori di sistema diversi da 5 a 1500 litri per soddisfare le diverse esigenze dei clienti nelle diverse fasi dei requisiti dei lotti di prodotto;

Fornitura di prodotti di diversa qualità: I prodotti di grado R&S (20395ES), grado GMP (20396ES), grado GMP sono conformi al sistema di gestione della qualità ISO 13485.

Dati di prova

Test di attività dell'enterochinasi:

Figura 1. L'effetto di taglio enzimatico di Sììì enterochinasi (20395ES) è coerente con Concorrente N

Nota: il substrato positivo (20391ES) è una proteina di fusione composta da due sequenze proteiche specifiche collegate da DDDDK (sito di riconoscimento e taglio dell'enterochinasi), con un peso molecolare complessivo di circa 64,6 kDa, che può essere tagliato specificamente in due frammenti proteici indipendenti dall'enterochinasi, con pesi molecolari di circa 27,9 kDa e 36,6 kDa, rispettivamente. Questo prodotto, come substrato dell'enterochinasi, può essere utilizzato per il rilevamento semi-quantitativo o qualitativo dell'attività enzimatica dell'enterochinasi ricombinante o naturale.

Test di purezza dell'enterochinasi:

Nota: il valore teorico dell'enterochinasi è 22,7 kDa. A causa dell'effetto di glicosilazione dopo l'espressione in Pichia pastoris, l'SDS-PAGE mostra che il peso molecolare della proteina target è di circa 40 kDa. In genere, le bande glicosilate avranno una banda leggermente diffusa che corre verso l'alto (come mostrato nella figura a destra). La nostra azienda può anche fornire l'enzima di deglicosilazione Endo H (Cat#20414) per i clienti per deglicosilare ed eseguire il gel per misurare la purezza (come mostrato nella figura a sinistra).

Test di specificità del taglio dell'enterochinasi:

Figura 3. Yeasen l'enterochinasi (20395ES) ha un taglio meno aspecifico rispetto al concorrente d'importazione N

Nota: Alle stesse condizioni, Sììì enterochinasi (20395ES) e enterochinasi del concorrente importato N sono stati utilizzati per i test di taglio enzimatico. I risultati mostrano che dopo la purificazione, le impurità di taglio non specifiche prodotte da Sììì enterochinasi (20395ES) sono significativamente inferiori a quelli del concorrente d'importazione N.

Enterokinase, test di stabilità accelerato con congelamento e scongelamento ripetuti:

Figura 4. Yeasen Il test di stabilità accelerata con congelamento e scongelamento ripetuto dell'enterochinasi (20395ES) mostra che l'attività enzimatica non è cambiata in modo significativo.

Nota: l'enterochinasi Yeasen (20395ES) ha selezionato casualmente 2 lotti, ha ripetuto il congelamento-scongelamento 10 volte e 20 volte; l'attività enzimatica non è cambiata in modo significativo rispetto all'attività enzimatica iniziale.

Conservazione a 25°C per 7, 16, 32 giorni, 37°C per 7, 14 giorni, l'attività enzimatica non è cambiata in modo significativo rispetto all'attività enzimatica iniziale.

2. Enzima Kex2 ricombinante, carbossipeptidasi B

Tabella 2. Guida alla selezione del prodotto Yeasen Recombinant Kex2 Enzyme, Carbossipeptidasi B

Numero di prodotto	20418ES	20417ES
Prodotto Nome	Proteasi Kex2 ricombinante, espressa nel lievito	CPB ricombinante, espresso in E. coli
Grado del prodotto	Grado GMP	Grado GMP
Fonte	Espressione ricombinante da Pichia pastoris	Espressione ricombinante da E. coli
Attività	≥10,0 unità/mg pro	≥170 Unità USP/mg pro
Sito di scissione	Riconosce e scinde specificamente i legami peptidici nel terminale acido carbossilico degli amminoacidi dibasici come Arg-Arg, Lys-Arg	Idrolizza specificamente le proteine ​​sul lato ammino-terminale degli amminoacidi basici (lisina, arginina, istidina) al C-terminale
Applicazione del prodotto	1. Scissione degli enzimi di processo nella produzione di farmaci peptidici. 2. Digestione enzimatica delle proteine ​​e mappatura dei peptidi, sequenziamento, ecc.	1. Produzione di insulina ricombinante e dei suoi analoghi. 2.Determinazione degli amminoacidi al C-terminale delle proteine. 3. Rimozione dei tag istidina al C-terminale delle proteine. 4. Produzione di altre sostanze peptidiche ricombinanti. 5. Sintesi enzimatica di alcuni composti speciali.

Enzima Kex2 combinato con carbossipeptidasi B: requisiti del processo di espressione in tandem, elevata resa dell'intermedio semaglutide dopo il taglio enzimatico

Efacilitare Base di produzione di enzimi di grado GMP

Base di produzione di enzimi molecolari ultra-puliti certificata ISO - UCF.ME, dotato di apparecchiature di purificazione AKTA e analisi fisico-chimica di livello industriale, unità di fermentazione ad alta densità da cento litri, officine di pulizia standard di livello diecimila e linee di produzione automatizzate. Possiede sistemi di fermentazione e purificazione di varie specifiche, tra cui 5L, 10L, 30L, 100L, 500L e 1.500L, con la capacità di aumentare la produzione da 5L a 1.500L nel campo dell'industrializzazione degli enzimi molecolari, soddisfacendo pienamente le esigenze di materie prime enzimatiche di base dei clienti a valle in diverse fasi come ricerca e sviluppo, scala pilota e produzione su larga scala.

Yeasen dispone di un solido team di ricerca e sviluppo e di una base di produzione di enzimi avanzata, che migliora costantemente la qualità e la capacità degli enzimi chiave per la produzione di semaglutide (enterochinasi ricombinante) attraverso una continua innovazione e ottimizzazione tecnologica, offrendo prezzi differenziati per diverse specifiche per soddisfare le diverse esigenze dei clienti nelle diverse fasi di produzione.

Informazioni sui prodotti promozionali

Nome del prodotto	Numero di prodotto	Specificazione	Prezzo di listino ($)	Promozionale Prezzo ($)
Enterochinasi bovina ricombinante, His, espressa nel lievito	20395ES60/76/90/ 92/94	100 U/500 U/ 5000 Io/ 100 KU/ 1 MU (1000 KU)	45/115/ 825/ 12000/ 360000	45/115/ 585/ 5600/ 19600

Informazioni sul prodotto correlate

Nome del prodotto	Numero di prodotto	Specificazione
Proteina di controllo della scissione (Enterochinasi)	20391ES03/11	1mg/4 mg
Proteasi Kex2 ricombinante, espressa nel lievito	20418ES60	100 μg
CPB ricombinante, espresso in E. coli	20417ES03/10	1 mg/10 mg
Endo H	20414ES92/97	10000 unità/50000 unità