UCF.ME™ UltraNuclease, altrimenti nota come nucleasi totipotente, nucleasi ad ampio spettro ed endonucleasi inibitoria non limitante, ha avuto origine da Serratia Marcescen ma è stata successivamente riprogettata e prodotta dal team di ricerca e sviluppo Yeasen, espressa in E. coli. Possiede un peso molecolare di 26,5 kD e un punto isoelettrico di 6,85. Sorprendentemente, ha la capacità di degradare completamente l'acido nucleico in oligonucleotidi 5'-monofosfato che vanno da 2 a 5 basi di lunghezza. Sia UltraNuclease che Salt Active UltraNuclease sono ottime alternative a Benzonase.
1. Che cosa è la nucleasi totipotente?
2. Quali sono gli scenari di utilizzo della nucleasi totipotente?
3. Quali sono i vantaggi che la nucleasi totipotente deve avere?
4. Domande frequenti
5. Prodotti correlati
1. Che cosa è la nucleasi totipotente?
Le nucleasi totipotenti sono endonucleasi geneticamente modificate con la capacità di degradare un'ampia gamma di forme di acidi nucleici, che comprendono acidi nucleici a singolo filamento, a doppio filamento, lineari, nativi e denaturati. Generano oligonucleotidi 5'-monofosfato con lunghezze che vanno da 3 a 5 basi e non mostrano alcun riconoscimento di basi specifiche. Queste nucleasi versatili mostrano una robusta stabilità e attività digestiva in varie condizioni, rendendole altamente efficienti per l'eliminazione di residui di acidi nucleici in campioni o prodotti. Ciò aumenta la purezza del campione e l'efficacia biologica dei prodotti, rendendo le nucleasi totipotenti la preparazione enzimatica preferita per la ricerca scientifica, i vaccini e le industrie come i prodotti farmaceutici proteici e polisaccaridici.
Inoltre, le nucleasi totipotenti svolgono un ruolo cruciale nella rimozione degli acidi nucleici durante la preparazione di vaccini, anticorpi, terapia cellulare e altri prodotti biologici, garantendo la conformità alle normative FDA che stabiliscono che l'acido nucleico residuo nel prodotto finale per uso terapeutico non deve superare i 10 pg/dose. Degradando gli acidi nucleici, le nucleasi totipotenti riducono la viscosità dei lisati cellulari, facilitando il processo di filtrazione/ultrafiltrazione della soluzione durante la purificazione di particelle derivate da cellule come virus, vettori AAV e corpi di inclusione. Ciò semplifica l'elaborazione, migliora la centrifugazione, aumenta l'efficienza di separazione di precipitazione e surnatante e aumenta l'efficacia della purificazione cromatografica, aumentando in definitiva la resa e la purezza del prodotto.
2. Quali sono gli scenari di utilizzo della nucleasi totipotente?
UltraNuclease ha una vasta gamma di applicazioni. Ecco gli scenari di utilizzo specifici.
2.1 Purificazione del virus (lentivirus, AAV, vaccino adenovirus ricombinante, virus inattivato, virus oncolitico, ecc.)
L'utilizzo di virus nel settore biomedico si sta espandendo in modo significativo, abbracciando applicazioni quali vaccini, terapia cellulare, terapia genica e vari altri campi. Le cellule ospiti responsabili della produzione di virus sono prevalentemente cellule a passaggio continuo (CCL). Le CCL presentano una predisposizione genetica per una crescita non regolata, che conferisce loro la capacità di proliferare indefinitamente. Tuttavia, la presenza di DNA residuo dalle CCL può comportare potenziali rischi, come la proliferazione incontrollata delle cellule umane che porta alla formazione di tumori. Inoltre, questi frammenti di DNA residuo possono contenere genomi virali infettivi, sollevando preoccupazioni sul rischio di infezione insieme alla tumorigenesi. Di conseguenza, misure di controllo rigorose sono imperative per la gestione del DNA residuo nei prodotti biologici, garantendone la sicurezza. A questo proposito, il nostro UCF.ME™ UltraNuclease offre una soluzione sicura per la purificazione dei virus.
Il sale svolge un ruolo fondamentale nell'attenuazione dell'aggregazione di proteine o virus, facilitando la separazione di DNA e RNA da proteine e altri componenti cellulari. Salt Active UltraNuclease, essendo un'endonucleasi non specifica, mostra un'attività ottimale ad alte concentrazioni di sale. In condizioni di sale elevato, gli enzimi ottengono un accesso migliore al DNA e all'RNA rilasciati, migliorandone la degradazione. Le nucleasi con attività elevata in ambienti ad alto contenuto di sale si dimostrano più efficaci nel migliorare i processi di purificazione. Salt Active UltraNuclease può essere impiegata per ridurre la viscosità nei surnatanti e nei lisati cellulari, migliorando l'efficienza di purificazione in condizioni di sale elevato. Questo enzima riduce anche i residui di acido nucleico dell'ospite al livello del picogramma, migliorando così le prestazioni e la sicurezza di varie applicazioni di prodotti biologici, tra cui la purificazione dei virus, la produzione di vaccini e la produzione di prodotti farmaceutici proteici e polisaccaridici.
2.2 Purificazione della proteina ricombinante espressa in E. coli
Alcune proteine espresse in E. coli hanno la tendenza ad aggregarsi in corpi di inclusione, complicando il processo di purificazione poiché spesso si intrecciano con il DNA ospite. Le cellule batteriche rotte risultanti possono presentare un'elevata viscosità, riducendo significativamente l'efficienza di purificazione delle proteine. Tuttavia, introducendo 10-50 U/mL di UCF.ME™UltraNuclease nella soluzione batterica durante la rottura ultrasonica e incubando il campione a 37°C per 30 minuti o a 4°C durante la notte dopo il completamento della rottura, la viscosità nella soluzione batterica può essere efficacemente ridotta. Ciò, a sua volta, migliora sostanzialmente l'efficienza del processo di purificazione. In sintesi, puoi contare sulla nostra UCF.ME™ UltraNuclease per facilitare l'efficace purificazione della proteina.
2.3 Prevenire l'aggregazione cellulare
Negli ultimi anni, l'uso di cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) crioconservate negli immunoassaggi è aumentato drasticamente. La caratteristica principale delle cellule PBMC è che sono molto facili da agglomerare dopo la rianimazione, il che può facilmente portare a una bassa qualità cellulare e a risultati di test inaffidabili. Quando le cellule vengono rianimate, la concentrazione appropriata (25-50 U/mL) di UCF.ME™UltraNuclease viene aggiunta al terreno di coltura e le cellule vengono co-coltivate, il che può prevenire efficacemente l'agglomerazione cellulare. Quindi, puoi sfruttare al meglio la nostra UCF.ME™ UltraNuclease per aumentare le probabilità di un esito positivo.
3. Quali sono i vantaggi che la nucleasi totipotente deve avere?
3.1 Ampia gamma di applicazioni
UCF.ME™ UltraNuclease è in grado di tagliare e degradare varie forme di DNA e RNA in diverse condizioni sperimentali e può essere utilizzato per rimuovere l'acido nucleico residuo in vari prodotti biologici.
3.2 Elevata purezza, elevata attività enzimatica
Per la nostra UCF.ME™ UltraNuclease, la purezza dell'enzima è maggiore o uguale al 99% (HPLC) e l'attività dell'enzima è maggiore o uguale a 1,5*106 U/mg (utilizzando un metodo quantitativo assoluto per il substrato generale).
3.3 Forte adattabilità
UCF.ME™ UltraNuclease ha un'elevata stabilità durante lo stoccaggio e il congelamento-scongelamento. Conserviamo UCF.ME™ UltraNuclease a -20 °C, 4 °C e 37 °C per rilevare l'andamento dell'attività enzimatica. Quando è stato posto a 37 °C per 2 settimane, non si è verificato alcun cambiamento significativo nell'attività enzimatica.Nel frattempo, per garantire la stabilità dell'enzima, utilizziamo una combinazione di ghiaccio secco + ghiaccio in borsa per trasporto UCF.ME™ UltraNuclease a casa tua. Ha anche una forte tolleranza e può adattarsi a una varietà di condizioni operative.
3.4 Rispettare la Farmacopea
UCF.ME™ UltraNuclease è prodotto in UCF.ME (Ultra Clean Factory. Molecular Enzyme) ed è un tipo di enzima ultra-pulito. Cos'è un enzima ultra-pulito? È un enzima molecolare che raggiunge standard qualitativi di nessun HCD、HCR、HCP, SENZA DNASI、SENZA RNASI, nessun residuo di proteasi, nessun residuo microbico, nessun agente patogeno, origine animale, inquinamento da antibiotici, residuo di endotossine ultra-basso, elevata attività enzimatica ed elevata purezza, ecc. Pertanto, puoi fidarti dei nostri prodotti, in modo sicuro e affidabile.
3.5 Produzione GMP
L'intero processo di produzione di UltraNuclease viene completato nell'officina di produzione GMP e il piano di controllo di qualità è rigorosamente a cura del farmacopea metodo, soddisfacendo la domanda su larga scala dalla ricerca e sviluppo alla produzione.
UCF.ME™ Partner di UltraNuclease —— Kit ELISA UltraNuclease
Nelle normali fasi di purificazione, UCF.ME™ Ultranucleasi viene facilmente rimosso come impurità. Per rilevare il residuo di UCF.ME™ UltraNuclease, YEASEN ha sviluppato il kit di supporto UltraNuclease ELISA, in grado di rilevare con precisione il residuo di UCF.ME™ UltraNuclease nel campione. Il kit ha un'eccellente linearità, ripetibilità, tasso di recupero e specificità.
Ultranucleasi Kit ELISA
L'intervallo lineare è compreso tra 0,047 e 3 ng/mL e R2 è maggiore di 0,99. Con una buona riproducibilità inter-batch, aggiungiamo una concentrazione fissa di UltraNuclease al campione e utilizziamo 3 diversi lotti di kit ELISA per il rilevamento. Il tasso di recupero del rilevamento è compreso tra il 70% e il 110% quando la concentrazione della nucleasi è compresa tra 3 e 0,186 ng/mL e il CV è inferiore al 10%. Inoltre, i tassi di recupero del campione simulato di UltraNuclease con diverse concentrazioni sono tutti compresi tra il 70% e il 130% e sono migliori rispetto ad altri marchi. Ha anche una forte specificità che abbiamo valutato il legame non specifico dell'anticorpo UltraNuclease a 8 campioni comuni. I risultati del gruppo di interferenza e del gruppo di controllo si sovrapponevano e non è stata osservata alcuna interferenza.
In seguito alla presentazione del DMF di UltraNuclease, YEASEN ha ottenuto i DMF di ultranucleasi attiva al sale della FDA statunitense.
Il numero di fascicolo è:
| Numero | Nome del prodotto | Numero di deposito |
| 1 | Ultranucleasi | MF037298 |
| 2 | Ultranucleasi attiva al sale | MF037815 |
4. Domande frequenti
D1: In quale fase aggiungere UltraNuclease?
R: Dipende dai campioni che stai trattando. Nella purificazione del virus, viene generalmente aggiunto dopo la chiarificazione del virus; nella purificazione delle proteine di E. coli, può essere aggiunto quando le cellule vengono lisate; nel trattamento dell'aggregazione cellulare, può essere aggiunto direttamente al mezzo per la co-coltivazione con le cellule.
D2: Se la temperatura di reazione non riesce a raggiungere i 37°C, come si usa?
UN: L'attività enzimatica di UltraNuclease è influenzata dalla temperatura, dal tempo di trattamento e dalle unità di attività enzimatica. Se la temperatura non riesce a raggiungere i 37°C, la quantità di enzima può essere aggiunta in modo appropriato o il tempo di incubazione può essere esteso.
D3: UltraNuclease è compatibile con gli inibitori della proteasi?
UN: Compatibile, ma tieni presente che molti inibitori della proteasi contengono EDTA. Quando l'EDTA inizia a essere superiore a 1 mM, l'EDTA inibirà l'attività di alcune nucleasi.
D4: Come rimuovere UltraNuclease?
UN: Può essere rimosso mediante metodi quali TFF, dialisi e colonne cromatografiche.
D5: Il kit UltraNuclease ELISA può essere utilizzato per rilevare altre marche di residui di nucleasi totipotenti?
UN: Non consigliamo di farlo. Il kit ELISA è completamente sviluppato sulla base di UltraNuclease e può quantificare accuratamente UltraNuclease. Le nucleasi altipotenti di altre marche potrebbero essere diverse da UltraNuclease in termini di sequenza e processo di produzione e i risultati del test potrebbero essere imprecisi.
5. Prodotti correlati
I prodotti forniti da Yeasen sono i seguenti.
Tabella 1 Prodotti correlati
| Nome del prodotto | Codice Prodotto | Specifiche |
| 20157ES25/60/80/90 | 25KU/100KU/1MU/5MU | |
| 20159ES25/60/80/90 | 25KU/100KU/1MU/5MU | |
| 36701ES59 | 96T | |
| Sale Attivo Kit ELISA UltraNuclease | 36703ES96 | 96T |