導入
ルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイキットは、医薬品開発に欠かせない中核ツールとして、遺伝子発現とシグナル伝達をリアルタイムで監視できるため、ハイスループットスクリーニング、有効性評価、ターゲット検証などの重要なプロセスで重要な役割を果たします。この技術の応用により、医薬品のスクリーニングと評価の効率が大幅に向上し、新薬の発見と開発が加速します。
ルシフェラーゼレポーター遺伝子検出原理
ルシフェラーゼレポーター遺伝子検出技術は、ルシフェリンをオキシルシフェリンに酸化する触媒作用を及ぼし、生物発光を発生させることで、ホタルルシフェラーゼ活性の定量分析を可能にします。この技術は、miRNA標的遺伝子の検証やプロモーター転写活性調節の分野で重要な応用価値を持っています。ルシフェラーゼ遺伝子の上流と下流に標的遺伝子の調節要素を挿入してルシフェラーゼレポータープラスミドを構築することで、細胞をトランスフェクトし、対応する刺激や処理を施すことができます。その後、細胞を溶解してルシフェラーゼ活性を測定することで、異なる刺激条件下での調節要素の活性変化を評価することができ、遺伝子発現の調節メカニズムをより深く理解することができます。
単一ルシフェラーゼ検出アプリケーションと二重ルシフェラーゼ検出アプリケーションの違い
レポーター遺伝子アッセイは、主にシングルルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイとデュアルルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイに分けられます。特定のアプリケーションでは、実験でシングルルシフェラーゼ検出システムを使用するか、デュアルルシフェラーゼ検出システムを使用するかをどのように判断すればよいでしょうか。違いを見てみましょう。
シングルルシフェラーゼレポーターアッセイシステム
レポーター遺伝子の数:単一のホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子。
トランスフェクションタイプ:単一のレポーター遺伝子プラスミド。トランスフェクション後、薬剤選択を使用して、ルシフェラーゼを発現する安定したレポーター遺伝子細胞株を構築します。
検出プロセス：ホタルルシフェラーゼ信号のみを検出する必要があり、操作が簡単で、検出期間が短いため、ハイスループット薬物スクリーニングに適しています。
アプリケーションシナリオ分析：通常は、安定した過剰発現モノクローナル細胞株の構築を通じて行われます。これらの細胞株の発現レベルは比較的安定しており均一であり、トランスフェクション効率と細胞生存率による実験変動の影響を受けません。操作は簡単で、ホタルルシフェラーゼ信号のみが検出されるため、データ分析がより便利です。検出時間が短いという利点と相まって、特にハイスループット薬物スクリーニングに適しており、大規模なサンプル検出のニーズを満たします。
デュアルルシフェラーゼレポーター遺伝子検出システム
報告された遺伝子量:ホタルルシフェラーゼとウミシイタケルシフェラーゼのデュアルレポーター遺伝子。
トランスフェクションタイプ:主に一過性トランスフェクションによる 2 つのレポーター遺伝子プラスミドの共トランスフェクション。
検出プロセス:最初にホタル信号を検出し、次にレニラ信号を検出する必要があり、2 つの比率 (ホタル/レニラ) が最終データの計算に使用されます。
アプリケーションシナリオ分析：通常は一過性トランスフェクションを介して行われ、内部参照としてレニラルシフェラーゼ遺伝子を含むプラスミドの共トランスフェクションにより、実験のベンチマークが提供され、細胞生存率やトランスフェクション効率などの外部要因の干渉が減少します。比率計算により、細胞数、トランスフェクション効率、細胞活性の変動を補正し、実験結果の精度を向上させることができます。遺伝子発現制御、シグナル伝達経路、薬物スクリーニングの分野で重要なツールです。
製品シリーズ
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製品名 |
バイオワンステップ |
着実に一歩ずつ |
ブライトワンステップ |
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製品コード |
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アプリケーションのシナリオと特徴 |
このキットは、信号強度と安定性の相対的なバランスを実現します。比較的高い信号強度を維持しながら、一定期間にわたって信号強度を比較的安定させます。 |
半減期は 5 時間以上持続します。特に最初の 2 時間以内は、発光値の変化は最小限です。超ハイスループットまたは 384 ウェル プレート アッセイに適しています。 |
高感度、高信号強度。高感度を必要とする実験に適しています。 |
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シグナル半減期 |
60分 |
5時間 |
30分 |
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運用特性 |
一歩 |
一歩 |
一歩 |
製品の利点
長い信号半減期:信号半減期は最大 5 時間に達し、ハイスループット実験のニーズを満たし、多数のサンプルによる最初のウェルと最後のウェルの時間差によって生じる信号の違いを回避し、より安定した信頼性の高い結果を保証します。
強力な蛍光信号:信号値は 8 桁に達する可能性があり、大きな検出ウィンドウと強力なデータ サポートを提供し、早期の薬物スクリーニングと有効性評価に役立ちます。
簡単な操作:ワンステップ操作で複雑な実験手順を省くことができます。検出試薬を追加して 5 分間待つだけで、機械を起動して検出できます。
複数の選択肢:さまざまなアプリケーション シナリオに応じて 3 つの異なる製品が用意されており、信号値と信号安定性の実験要件に基づいて選択できます。
製品データ
01イェーセンのパフォーマンス比較 さまざまなレポーター遺伝子アッセイキット
3種類のアッセイキットの検証をホタルルシフェラーゼを安定発現する細胞株で実施した結果、Bright-One Step製品はシグナル値が高く、Steady-One Step製品はシグナル半減期が長く、シグナルがより安定しており、Bio-One Step製品はシグナル値が高いだけでなく、シグナル半減期も長く維持されていることが示されました。
図1. さまざまな
02
図2.
03
図3.
操作手順
01 細胞トランスフェクション
試薬を細胞懸濁液に直接加え、ピペットで 5 回上下させて完全に混合し、細胞が完全に溶解するまで 5 分間待ちます。
02 サンプルロード
検出プレートの各ウェルに、混合物（検出試薬 + 細胞培養培地）を 100 μL ピペットで入れます。
03 蛍光検出
プレートリーダーのパラメータを設定します。検出プレートをプレートリーダーに置き、数秒間振動させてから検出を続行します。
製品リスト
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製品カテゴリー |
製品名 |
製品コード |
製品仕様 |
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ルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイキット |
11411ES60/80/81 |
100T/10×100T/1000T |
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11413ES60/80/81 |
100T/10×100T/1000T |
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11412ES60/80/81 |
100T/10×100T/1000T |
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デュアルルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイキット |
11402ES60/80 |
100T/1000T |
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11405ES60/80 |
100T/1000T |