ホタルルシフェラーゼは分子量約61kDaのタンパク質で、ATP、マグネシウムイオン、酸素の存在下でルシフェリンをオキシルシフェリンに酸化する触媒作用を持ち、約560nmの波長の生物発光を発します。ウミシイタケルシフェラーゼは分子量約36kDaのタンパク質で、酸素の存在下でセレンテラジンをセレンテラミドに酸化する触媒作用を持ち、酸化プロセス中に480nmの波長を発します。生物発光について。両方の生物発光は化学発光によって測定できます。検出原理を図1に示します。

 図1: ホタルおよびウミシイタケルシフェラーゼアッセイの概略図

通常、標的遺伝子の5'UTRまたはプロモーターをホタルルシフェラーゼの上流にクローニングするか、3'UTRをホタルルシフェラーゼの下流にクローニングし、プロモーターまたは調節要素の転写調節効果をホタルルシフェラーゼの量を検出することで検出します。細胞数、トランスフェクション効率などの差を排除するために、内部コントロールとしてレニラルシフェラーゼを使用しました。デュアルルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイキットは、ルシフェリンを基質としてホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子の活性を検出し、次にセレンテラジンを基質として蛍光反応を消光しながらレニラルシフェリン酵素レポーター遺伝子活性を検出します。キットは高感度という特徴があります。

特徴

強化された溶解能力: ほとんどの細胞タイプを完全に溶解できます。

より強いシグナル: 弱いプロモーター発現の正確な検出。

より高い感度: 10～20 ピコモルのルシフェラーゼ分子まで検出可能。

より広い線形範囲: 線形検出範囲は酵素濃度の 8 桁を超えます。

アプリケーション

 miRNAと標的遺伝子3'UTRの相互作用の検証

lncRNA-miRNA相互作用の検証

プロモーター領域における転写因子制御の検証

シグナル伝達経路解析

SNP活性解析

仕様

コンポーネント

配送と保管

デュアルルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイキット製品は、-15℃～-25℃で1年間保存する必要があります。

数字

図1. YEASEN （カタログ番号：11402）は、ブランドPと同等の蛍光強度を持っています。

図2 . Y EASEN (カタログ番号: 11402) 検出試薬はルシフェラーゼと相互作用して最適な発光強度を実現します。 Renilla ルシフェラーゼ基質を添加すると、ホタル ルシフェラーゼの生物発光が消光します。実質的に完全に消光できます。                                                           

ドキュメント:

安全データシート

11402 MSDS HB220209 EN.PDF

マニュアル

11402 マニュアル HB241230 EN.pdf

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