細胞培養の過程では細胞の消化が必要になることが多く、細胞を消化するために使用されるトリプシンは細胞培養に不可欠であり、細胞の増殖状態に影響を与えるため非常に重要です。

トリプシンは大きく分けて2種類あり、1つは組換えトリプシン、もう1つは非組換えトリプシンです。

• 非組み換えトリプシンは動物由来の動物抽出液から得られ、また、動物の消化器系によく見られ、牛や豚の膵臓組織から直接抽出されるトリプシンの伝統的な用途でもあります。
• 組み換えトリプシンは遺伝子組み換え技術を使用して製造されており、動物由来ではありません。

製品紹介と応用

非組換えトリプシン（動物由来）

製品の特徴：

非組み換えトリプシン（トリプシンとも呼ばれる）は、牛、羊、豚の膵臓から抽出されたセリンタンパク質分解酵素であり、正に帯電したリジンとアルギニンのカルボキシル末端を特異的に切断することができ、多重結晶化によって精製され、さらにクロマトグラフィーと限外濾過技術によって調製された、動物由来のものです。

膵酵素は膜貫通タンパク質や細胞外マトリックス中のカドヘリン、インテグリンなどのタンパク質に作用することができるため、現在では組織や単層細胞の分離によく使用されています。トリプシンは細胞間のタンパク質を加水分解して個別の細胞にすることができますが、異なる組織や細胞のトリプシンに対する反応は異なり、分散した細胞の活性もトリプシンの濃度、反応温度、時間に関係しており、トリプシンの細胞分散能力はpH7〜9、温度37℃の条件下で最も強くなります。キレート剤としてEDTAをトリプシン溶液に加えると、カルシウムとマグネシウムが6本の歯構造に結合し、細胞間の接着を弱め、トリプシンによる加水分解された標的ペプチド結合の獲得を促進できます。

バイオ医薬品分野における初期のトリプシンの主な用途はインスリンの生産でしたが、すぐに他の細胞培養分野でも使用されるようになりました。動物の膵臓酵素は血清培養によく使用され、異なる細胞に添加されるトリプシンの組成と濃度は異なります。

アプリケーション

1. インスリンおよび不活化ワクチンの製造;
2. 組織細胞の分離および培養;
3. 臨床および外科的使用;
4. 食品産業における加工助剤;

組み換えトリプシン（動物由来成分不使用）

製品の特徴

組み換えトリプシンは遺伝子工学技術を利用して生産される酵素であり、安定性が良好で、純度が高く、動物由来ではないという利点があります。現代のバイオ医薬品の生産プロセスでは、動物由来を含む原材料の使用により、狂牛病のBSE、口蹄疫ウイルスなど、人獣共通感染症を引き起こす潜在的なウイルス源が製品に持ち込まれる可能性があります。汚染源を減らすために、トリプシンは遺伝子工学技術を通じて合成され、従来の豚や牛のトリプシンがもたらす可能性のあるウイルス汚染のリスクを解決します。

組み換えトリプシンは、大部分が組み換え大腸菌または酵母システムによって組み換え発現され、多段階クロマトグラフィーによって精製され、キモトリプシンなどのヘテロ酵素汚染がありません。組み換えトリプシンは、天然抽出トリプシンと同じ特性を持ち、豚トリプシン配列と相同なアミノ酸配列を持ち、ポリペプチド鎖のリジンとアルギニン残基のカルボキシル基を特異的に切断します。動物由来の汚染がなく、純度が高いため、医薬品開発、生化学研究、プロテオミクスなどの分野で幅広い用途があります。

市場で主流の組み換えトリプシンは、DNA組み換え技術を使用して大腸菌または酵母で発現させた組み換え豚トリプシンであり、そのアミノ酸配列は豚トリプシンと完全に一致し、天然トリプシンと同じ活性と特異性を備えています。223個のアミノ酸で構成され、6対のジスルフィド結合が含まれています。酵素には、α-トリプシンとβ-トリプシンという2つの活性型のトリプシンが含まれています。その活性は、PMSFやTLCKなどのセリンプロテアーゼ阻害剤、EDTAなどの金属イオンキレート剤などによって阻害されます。組み換えトリプシンは無血清培養に使用され、トリプシンと同様に、異なる細胞に異なる成分と濃度のトリプシンが追加されます。

アプリケーション

1. ワクチンおよび組み換えインスリンの生産;
2. 細胞分析のための組織サンプルの準備;
3. 免疫細胞療法;
4. バイオ医薬品の製造;
5. タンパク質配列、構造、オミックス研究

製品の詳細な比較

製品	非組換えトリプシン（動物由来）	組み換えトリプシン（動物由来成分不使用）
アイテム	40123ES（フェノールレッド(-),EDTA(+)） 40124ES（フェノールレッド(-),EDTA(-)） 40126ES（フェノールレッド(+),EDTA(-)） 40127ES（フェノールレッド(+),EDTA(+)）	40512ES 20416ES（MSセーフ）
ソース	牛、豚、羊の膵臓から採取	大腸菌（40512ES） ピキア・パストリス（20416ES）
安全	潜在的病原体による汚染	外因性ウイルス汚染なし
純度	1:250トリプシン溶液の90%以上が不純物である	高純度（β-トリプシン≥ 70%、 α-トリプシン≤20%）
消化細胞の種類	最も連続した強接着細胞株	最も連続した強接着細胞株
キモトリプシン制限	トリプシン 2500 単位あたりキモトリプシン 50 単位以下。	ミロシナーゼやその他の不純物酵素の汚染なし
特定の活動	≥2500 USP単位/mgタンパク質	≥3800 USP単位/mgタンパク質
消化効果	不安定	消化力が強く、酵素の量が少ない
セルフカット率	自己切断しやすく、自己切断断片を生成し、質量分析の結果に影響を与える。	自己切断しやすく、自己切断断片を生成し、質量分析の結果に影響を与える。
溶解した液体	Ca2+、Mg2+を含むまたは含まないHBSS溶液	Ca2+およびMg2+を含むまたは含まないHBSS溶液（40512ES） 1mM HCL（20416ES）
細胞の生存	普通	普通
凍結融解が必要かどうか	はい	はい

細胞消化に使用される最も一般的なトリプシンに加えて、次のような他の多くの種類の消化酵素製品も使用できます。

コラーゲナーゼの応用分野について

コラーゲナーゼは、Pro-X-Gly-Pro配列を特異的に認識し、配列内の中性アミノ酸（X）とグリシン（Gly）間のペプチド結合を切断できるペプチダーゼエンドヌクレアーゼです。コラーゲナーゼは、3本鎖スーパーコイル構造を持つ天然コラーゲン原繊維を分解できる唯一のプロテアーゼであり、結合組織と上皮組織の細胞外マトリックス内の他のタンパク質、多糖類、脂質を効果的に加水分解できるため、この製品は組織の消化に非常に適しています。

1. コラーゲナーゼ I。上皮細胞、肝臓、肺、脂肪、副腎組織細胞の調製によく使用されます。
2. コラーゲナーゼ II は、心臓、骨、筋肉、肝臓、甲状腺、軟骨などの組織由来細胞の製造に使用されます。
3. コラーゲナーゼ III は、乳腺細胞の調製によく使用されます。
4. コラーゲナーゼ IV は、膵島細胞の調製や、受容体の完全性を維持する必要がある細胞調製実験によく使用されます。
5. コラーゲナーゼ V。膵島細胞および結合組織細胞の分離に適しています。

複合トリプシンの応用分野について

Accutase は、タンパク質分解活性とコラーゲナーゼ活性を含む細胞消化物であり、従来の組織培養容器や接着培養容器からの細胞を消化するためのトリプシン-EDTA 消化物の完全な代替品です。Accutase は、分離された細胞が完全な表面抗原を保持し、動物または細菌由来の成分を含まないため、組織解離と細胞分離に適しており、細胞表面標識、ウイルス増殖分析、フローサイトメトリー、バイオリアクター関連アッセイなどの後続の実験の要件を満たすことができます。

膵酵素代替物の応用分野

PerfCell Tryzyme™ Express 酵素製品は純度が高く、細胞へのダメージが少なく、消化が穏やかで、室温で安定して保存できるため、さまざまな細胞株培養に最適な消化酵素です。このタイプの製品は、不活性化にトリプシン阻害剤を使用する必要がなく、動物由来成分を含まないため、一部の無血清成長接着細胞実験に適しています。

ディスパーゼの応用分野について

ディスパーゼ II ディスパーゼ II は非特異的メタロプロテアーゼであり、細胞生物学ではさまざまな組織や臓器から単一細胞を分離するためによく使用され、一次細胞の分離、細胞の継代などの後続の細胞培養で使用され、懸濁細胞培養中に発生する細胞凝集を排除するためにも使用できます。細胞生物学で一般的に使用される他のプロテアーゼ (トリプシン、コラーゲナーゼ、プロナーゼなど) と比較して、この酵素には次の利点があります。

1. 細胞へのダメージが少なく、細胞膜の完全性を維持できる、迅速で効果的かつ穏やかな細胞消化酵素。
2. 細菌由来であり、マイコプラズマやその他の動物ウイルスによる汚染はありません。
3. 安定性が高く、温度、pH、血清成分の影響を受けません。
4. さまざまな種類の組織や細胞の分離に使用できます。

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カタログ番号	製品名	サイズ
40123ES60	PerfCel™l トリプシン-EDTA (0.25%)、フェノールレッド	100mL
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