等温核酸増幅技術は、増幅原理の違いにより、多くの種類に分類できます。最も一般的で広く応用されている方法は、2000年に日本の納富らが開発したループ媒介等温増幅（LAMP）技術です。LAMPの技術的特徴は、標的遺伝子の6つの領域を標的とする4つのプライマーを設計し、鎖置換型Bst DNAポリメラーゼを使用して、60〜65°Cの一定温度で増幅反応を行うことです。これにより、15〜60分以内に10 9 -10 10倍の増幅が達成されます。
Bst DNA ポリメラーゼは、LAMP 等温増幅技術の中核酵素です。強力な熱安定性、鎖置換活性、ポリメラーゼ活性を備えており、一定温度条件下でテンプレートの迅速で効率的かつ特異的な増幅を可能にします。増幅に熱変性サイクルを必要とする PCR とは異なり、LAMP 実験全体は、そのようなサイクルを必要とせずに 1 時間以内に完了できます。
製品の利点
グリセロールフリー酵素、凍結乾燥に適しています
常温輸送でコストを削減
強力な鎖置換活性、感度と安定性
迅速な水分補給、操作が簡単
パフォーマンスハイライト
01 蛍光染料法の応用
1、高い感度と優れた特異性
RT-LAMP蛍光色素増幅システムでは、凍結乾燥粉末ケーキ14405ESの増幅性能は液体Bst酵素（グリセロールを含む、およびグリセロールを含まない）の増幅性能と一致しており、どちらも50コピー/Tの感度で100％検出できます。特異性は良好で、NTC（ネガティブテンプレートコントロール）の48ウェルでは検出されませんでした。
2、優れた熱加速安定性
RT-LAMP蛍光色素増幅システムでは、凍結乾燥粉末を45°Cで7日間、45°Cで15日間、室温で19日間保存処理しました。熱加速後、製品の性能はグリセロールフリーBst酵素の液体バージョンと一致し、NTC（ネガティブテンプレートコントロール）ではピークは観察されませんでした。
3、加速後の再凍結をサポート
RT-LAMP蛍光色素増幅システムでは、凍結乾燥粉末をそれぞれ45°Cで7日間、45°Cで15日間保存処理しました。熱加速処理後の凍結乾燥粉末は、次に2回目の凍結乾燥（単一酵素およびRT-LAMP試薬を含む）にかけられました。実験では、加速処理および2回目の凍結乾燥後、製品の性能はグリセロールフリーBst酵素の液体バージョンと一致しており、NTC（ネガティブテンプレートコントロール）にピークは見られませんでした。製品の安定性は良好で、2回目の凍結乾燥および2回目の凍結乾燥後の加速をサポートしています。
02 pH比色法の応用
1、高い感度と優れた特異性
RT-LAMP pH比色増幅システムでは、凍結乾燥粉末ケーキ14405ESの増幅感度は50コピー/T（検出率100％）に達し、特異性は良好で、NTC（ネガティブテンプレートコントロール）の24ウェルでは検出されませんでした。
2、優れた熱加速安定性
RT-LAMP pH比色増幅システムでは、凍結乾燥粉末14405ESの45°Cで15日間の熱加速安定性、加速後の二次凍結乾燥後の安定性（45°Cで7日間の加速後の再水和）、および再水和後の保存安定性（再水和後-20°Cで7日間保存）を調査しました。実験では、14405ES製品は安定性が良好で、熱加速後の製品性能に影響を与えず、加速後の二次凍結乾燥をサポートしていることが示されました。
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製品タイプ |
製品機能 |
製品名 |
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RT-LAMPミックス |
蛍光染料 |
RT-LAMP 色素アッセイキット（UDG Plus） |
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pH指示薬 |
RT-LAMP pH 感度染料キット |
13906ES |
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凍結乾燥可能なpH指示薬 |
RT-LAMP pH 感受性染料発色性バージョン凍結乾燥可能キット |
13920ES |
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Bst酵素 |
グリセロール |
Hieff® Bst Plus DNAポリメラーゼ（40 U/μL） |
14402ES |
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グリセロールフリー |
凍結乾燥 Bst Plus DNA ポリメラーゼ (60 U/μL、グリセロールフリー) |
14405ES |
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バッファ |
ベーシックバッファー（染料等不使用） |
10× Hieff® Bst Plus DNAポリメラーゼバッファー |
15441ES |