PCR に従来の高忠実度酵素を使用する場合、いくつかの厄介な問題に遭遇することは避けられません。たとえば、忠実度が十分でない場合があり、増幅された断片を配列した後でも、ターゲット塩基に突然変異や欠失が生じる可能性があります。増幅時間も比較的長く、5kb の断片を増幅するのに 2 時間近くかかることもあります。現在、XiaoYi は、お客様の悩みを解決するために、高速高忠実度 PCR を導入しています。-- Hieff Canace™ AdvanceFast PCR マスター ミックス (超高速高忠実度 PCR プレミックス)。
2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR マスター ミックス (染料付き)には、電気泳動インジケーターがあらかじめ添加されており、PCR 産物を電気泳動に直接使用できます。増幅産物は平滑末端です。この高忠実度酵素ミックスは、高速、シンプル、高感度、高特異性、安定性という利点があります。反応システムでは、プライマーとテンプレートのみを追加する必要があります。さらに、この製品には特定の保護剤も含まれており、これにより、高忠実度 PCR プレミックスは、繰り返しの凍結融解後でも安定した活性を維持します。
製品の特徴
- 高忠実度: ミスマッチ率が低く、GC 変異が発生しやすい配列では塩基ミスマッチ比が 231/300,000 です。
- 高速増幅速度: 伸長速度は 1 kb あたり 5 秒と高速です。
- 幅広い適用性: GC 含有量が 20 ～ 80% の遺伝子をカバーでき、マウス溶解物および 20% の血液にも耐性があります。
- 優れた安定性: 製品の性能に影響を与えることなく、37°C で 7 日間保存できます。
- 高速かつ便利: 増幅のためにプライマーとテンプレートを追加するだけで、直接電気泳動するためのローディングダイが付属しています。
製品性能デモンストレーション
高い忠実度、低いミスマッチ率
異なる種のゲノムをテンプレートとして使用し、塩基の変異/損失が発生しやすいGCリッチフラグメント6つを選択して増幅しました。それぞれのPCR産物をベクターにクローン化し、各配列の100個の単一クローンを選択して配列決定し、塩基の不一致/変異の発生を確認しました。結果は、高速高忠実度PCRマスターミックス（10164ES）が、国内外のブランドの試薬と比較して、塩基の不一致/変異率が優れていることを示しました。
延長時間は最大5秒/kbに達する可能性があります
高速高忠実度酵素プレミックス (10164ES) と製品 T を使用して、100 ng のヒトゲノム DNA テンプレートから、伸長速度 5 秒/kb で、伸長時間 5 秒/kb で、さまざまな長さの断片 (0.4～10 kb) を増幅しました。結果は、高速高忠実度酵素プレミックス (10164ES) が 10kb 以内の断片を伸長速度 5 秒/kb で増幅できることを示しました。
GC含有量の異なる遺伝子断片を増幅できる
高速高忠実度酵素プレミックス (10164ES) を使用して、ヒトゲノム DNA テンプレートから GC 含有量が 23 ～ 76% の遺伝子断片を増幅し、伸長時間を 5 秒/kb に設定しました。結果は、この製品が優れた増幅特異性を持ち、GC 含有量の異なる断片を増幅できることを示しました。
GC含有量が異なる遺伝子断片を増幅可能
高速高忠実度酵素プレミックス (10164ES) を使用して、異なるサンプルからさまざまな長さの断片を増幅します。伸長時間は 1 キロベースあたり 5 ～ 10 秒に設定されています。結果は、この製品が優れた増幅特異性を示し、さまざまなテンプレートからのさまざまな断片の増幅と互換性があることを示しています。
注: 1. マウスゲノム DNA 1 kb; 2. マウスゲノム DNA 2 kb; 3. マウスゲノム DNA 6 kb; 4. トウモロコシゲノム DNA 1 kb; 5. イネゲノム DNA 2 kb-A; 6. イネゲノム DNA 2 kb-B; 7. ヒト 293 細胞 cDNA 1 kb; 8. ヒト 293 細胞 cDNA 2 kb; 9. ヒト 293 細胞 cDNA 3 kb; 10. ヒト 293 細胞 cDNA 12 kb; 11. 大腸菌培養液 8 kb; 12. 大腸菌培養液 16 kb; 13. イネゲノム DNA 10 kb-A; 14. イネゲノム DNA 10 kb-B; 15. イネゲノム DNA 10 kb-C; 16. イネゲノム DNA 20 kb-A; 17. イネゲノム DNA 20 kb-B; 18. ヒト血液直接増幅 3 kb。
異なる種間でのテンプレート増幅の高検出率
高速高忠実度酵素プレミックス (10164ES) を使用して、アラビドプシス、菜種、ジャガイモの 0.5～10 kb のさまざまな GC 含有量の断片を、5 秒/kb の伸長時間で増幅しました。結果は、高速高忠実度酵素プレミックス (10164ES) が確実に増幅を成功させることを示しました。
高速高忠実度酵素プレミックス (10164ES) を使用して、アラビドプシス、菜種、ショウジョウバエ、線虫、ゼブラフィッシュからのランダム配列 (ランダムに選択) を増幅しました。断片サイズは 0.5～10 kb で、GC 含有量の 20～80% をカバーしています。伸長時間は 5 秒/kb に設定しました。結果から、高速高忠実度酵素プレミックス (10164ES) は検出率が高いことがわかりました。
優れた安定性
37℃でそれぞれ3日間と7日間加熱加速保存した高速高忠実度酵素プレミックス（10164ES）を使用して、100 ngのヒトゲノムDNAから3 kbと5 kbのDNA断片を増幅し、伸長時間を5秒/kbに設定しました。結果は、製品の安定性が良好であることを示しています。
顧客トライアルフィードバック
動物gDNA-120bp-50%GC
顧客評価: PCR プロセスは高速で、バンドは適切であり、アガロースゲル電気泳動に直接ロードできます。N ブランドのバンドは上方に偏っていますが、これは独自のバッファーの影響によるものである可能性があり、ローディングバッファーが追加されていないため、この製品は現在の実験プロトコルの高忠実度酵素を置き換えることができます。
植物cDNA-729bp-45.13%GC
顧客評価: T ブランドと比較して、クローニング バンドはより鮮明で均一であり、PCR プロセス全体が高速です。ゲルを実行するときに追加の染料を追加する必要がないため、非常に便利で時間の節約になります。
微生物gDNA-1158、1953bp-58.8%、52.9%GC
顧客評価：Vブランドと比較すると効果は同等ですが、個人的にはさらに優れていると感じています。
植物cDNA-2000bp-40%GC
顧客評価：効果は非常に良く、ストリップは鮮明です。
高忠実度PCR選択ガイド
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製品の位置付け |
製品名 |
猫＃ |
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5秒/kb、忠実度と速度を確保（染料使用） |
10164ES |
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5秒/kb、忠実度と速度を確保（染料なし） |
2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR マスターミックス |
10163ES |
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83×Taq、高検出率（染料あり） |
2×Hieff Canace™ Plus PCR マスターミックス（染料付き） |
10154ES |
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83×Taq 単一酵素 + バッファー別 |
10153ES |