逆転写は、RNA を相補 DNA (cDNA) に変換するプロセスであり、逆転写酵素によって媒介されます。アニーリング プライマーが存在する場合、逆転写酵素はまず RNA テンプレートに結合します。逆転写酵素の RNA 依存性 DNA ポリメラーゼ活性は、反応混合物から dNTP を取り込むことで cDNA を合成します。このプロセスにより、cDNA:RNA ハイブリッド鎖が形成されます。これは、第 1 鎖 cDNA 合成として知られています。
モロニーマウス白血病ウイルス（M-MLV）逆転写酵素は、分子生物学実験室の手順で一般的に使用されている逆転写酵素の1つです。より高い逆転写効率、より優れた熱安定性、およびcDNA合成速度の向上を実現するために、元の逆転写酵素は多くの場合遺伝子組み換えされています。現在、市販されている逆転写試薬は、通常、15〜30分の反応時間を必要とし、これは比較的長いです。反応サンプルの数が多い場合、全体的な時間消費が大幅に増加する可能性があります。YESSENの既存の5分逆転写シリーズ製品は、わずか5分で逆転写プロセスを完了できるため、時間を節約し、非常に効率的です。
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製品の位置づけ |
製品名 |
猫＃ |
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迅速、効率的、高収量の逆転写プレミックス |
Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA合成スーパーミックス（qPCR用） |
11156ES |
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迅速、効率的、高収量の逆転写プレミックス（gDNA除去機能付き） |
Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA 合成スーパーミックス (qPCR 用) (DNA ダイジェスター プラス) |
11155ES |
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gDNA除去と逆転写プレミックスの迅速なワンステップ完了 |
11151ES |
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フレキシブルプライマー選択高速逆転写キット（gDNA除去機能付き） |
11150ES |
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フレキシブルプライマー選択高速逆転写キット（gDNA除去および追跡染料付き） |
Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA合成キット |
11149ES |
ブティックおすすめ1
迅速、効率的、高収量の逆転写プレミックス（gDNA 除去機能付き）（カタログ番号 11155ES）
さまざまなテンプレートからの高い逆転写収率
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サンプル |
293T細胞 |
シロイヌナズナ |
ねずみ |
魚の肝臓 |
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11155ES |
23.4↓ |
19.6↓ |
24.9↓ |
21.1↓ |
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ブランドA |
24.9 |
21.3 |
27.5 |
21.3 |
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ブランドB |
26.1 |
20.5 |
27.1 |
23.1 |
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ブランドC |
25.7 |
19.8 |
27.3 |
21.9 |
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ブランドD |
24.3 |
21.3 |
28.1 |
24.5 |
図。ヒト 293T 細胞、シロイヌナズナ、マウス肝臓、魚肝臓の RNA テンプレートを使用して逆転写を行いました。ブランド A、B、C、D はすべて 2 段階消化逆転写試薬で、逆転写時間は 15 分から 20 分までさまざまです。テスト結果から、Hifair 11155ES 5 分逆転写キットは他のブランドと比較して収量が高く、Ct 値が低いことが示されています。
ブティックのおすすめ2
5分間のワンステップ消化および逆転写プレミックス(カタログ番号11151ES)
高い逆転写収量
図。ヒト 293T 細胞 RNA をテンプレートとして使用し、3 つの遺伝子をそれぞれテストしました。ブランド A、B、C はすべて、ワンステップ gDNA 除去および逆転写試薬です。テスト結果によると、1 μg および 10 ng の総 RNA の入力で、11151ES キットによる逆転写の収量は他のブランドよりも優れており、Ct 値が小さくなっています。
図。Arabidopsis thaliana RNA をテンプレートとして使用する場合、ブランド A、B、C はすべてワンステップ gDNA 除去および逆転写試薬です。テスト結果によると、1 μg および 10 ng の総 RNA の入力で、11151ES キットによる逆転写の収量は他のブランドよりも優れており、Ct 値も小さくなっています。
優れた感度
図。ヒト 293T 細胞 RNA をテンプレートとして使用し、GC 含有量が 30%、50%、60%、70% の遺伝子を増幅しました。100 pg、1 ng、10 ng、100 ng、1 μg の総 RNA 入力を使用して逆転写を行い、蛍光定量検出を行いました。結果は、11151ES が 100 pg から 1 μg の範囲の RNA 入力の逆転写に対応できることを示しています。
ブティックのおすすめ3
5分でできる高速逆転写キット(カタログ番号11149/11150ES )
最小検出限界が10 pgまでの高感度
図。293T 細胞の全 RNA をテンプレートとして使用し、11149ES で逆転写を行い、得られた cDNA を qPCR 定量分析にかけました。結果は、11149ES が 10 pg から 1 μg の範囲の RNA 入力を正常に逆転写し、正確な定量結果を保証することを示しています。
増幅性能は良好で、14 kbの断片を最長増幅できる。
図。293T 細胞の全 RNA をテンプレートとして、11149ES で逆転写を行い、得られた cDNA を PCR 検出しました。結果は、11149ES が 1 kb から 14 kb の長さの cDNA 断片を合成できることを示しており、その後の PCR には特定のシナリオが適用可能です。10 kb を超える断片を直接逆転写する必要がある場合は、最終断片を確実に取得するために、逆転写時間を 20 ～ 30 分に延長することをお勧めします。
逆転写効率の比較
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RNA入力量 |
CT値 |
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11149ES |
ブランドA |
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1μg |
15.2 |
15.5 |
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100 ng |
18.0 |
18.5 |
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10 ng |
21 |
21.7 |
|
1 ng |
24.5 |
25.1 |
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100ページ |
29.1 |
29.7 |
|
10ページ |
32.7 |
34.3 |
図。293T細胞からの全RNAをテンプレートとして使用し、11149ESとブランドAで逆転写を行いました。11149ESはgDNA除去ステップを経ませんでした。得られたcDNAをqPCR定量分析にかけました。結果によると、ブランドAの逆転写時間は13分でしたが、11149ESは5分でした。異なる製品の定量分析により、11149ESのCt値は競合ブランドのものよりも小さいか同等であることが明らかになりました。これは、11149ESの5分間の逆転写効率がブランドAよりも優れているか、ほぼ同等であることを示しています。
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RNA入力量 |
CT値 |
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11149ES |
ブランドB |
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1μg |
16.2 |
17.4 |
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100 ng |
19.0 |
20.5 |
|
10 ng |
22 |
23.8 |
|
1 ng |
26 |
27.9 |
|
100ページ |
31.4 |
33.2 |
|
10ページ |
32.9 |
35.6 |
図。293T細胞からの全RNAをテンプレートとして使用し、11149ESとブランドBで逆転写を行いました。11149ESはgDNA除去ステップを経ませんでした。得られたcDNAをqPCR定量分析にかけました。結果によると、ブランドBの逆転写時間は20分でしたが、11149ESは5分でした。異なる基質量の定量分析により、11149ESのCt値はブランドBのCt値よりも小さいか同等であることが明らかになりました。これは、11149ESの5分間の逆転写効率がブランドBよりも優れているか、ほぼ同等であることを示しています。
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方法 |
製品の位置づけ |
製品名 |
猫＃ |
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染料ベースのqPCR |
高特異性ユニバーサル定量プレミックス（染料ベース） |
Hieff UNICON™ アドバンス qPCR SYBR マスターミックス |
11185ES |
|
高感度ユニバーサル定量プレミックス（染料ベース） |
11184ES |
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逆転写 |
5分間のワンステップ消化および逆転写プレミックス（qPCR用） |
11151ES |
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|
5 分間の高速逆転写、最大 14 kb の cDNA 合成が可能、gDNA 除去機能付き (PCR/qPCR 用) - トレーサー バージョン |
Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA合成キット |
11149ES |
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|
5 分間の高速逆転写、最大 14 kb の cDNA 合成が可能、gDNA 除去機能付き (PCR/qPCR 用) |
Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA合成キット（染料なし） |
11150ES |
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|
高品質のファーストストランド cDNA 合成プレミックス、gDNA 除去付き (qPCR 用) |
Hifair™ III 1st Strand cDNA 合成スーパーミックス (qPCR 用) (gDNA ダイジェスター プラス) |
11141ES |