——より多くの遺伝子型判定、より少ない時間とより少ない試薬
PCR ベースのジェノタイピングやその他の実験では、サンプルからゲノム DNA を精製する必要がある場合がよくあります。テストするサンプルが多い場合、ゲノム DNA を精製するプロセスは時間がかかり、繰り返しが多く、コストがかかります。YEASEN Biology は、Taq DNA ポリメラーゼを改良し、PCR 反応システムを最適化することで、ゲノム精製の必要性を排除した一連の Direct PCR Kit 製品を開発しました。
賢いPCR: ダイレクトPCR
YEASEN のダイレクト PCR キットは、サンプルから直接開始し、最小限の生のサンプル (図 1-A) またはその溶解産物 (図 1-B) をゲノム精製せずに PCR ベースのジェノタイピング (図 1) のテンプレートとして使用します。従来の PCR ベースのジェノタイピングと比較して、ダイレクト PCR キットは使用するサンプルが少なく、操作が簡単で、実験コストが低く、高スループットのサンプル検出が可能です。
図1 直接PCR増幅ワークフロー
A.直接法: 少量のサンプルを採取し、PCR マスター ミックスに直接加えて PCR 識別を行います。技術的な利点
直接的: 時間と費用のかかる DNA 精製は必要ありません。
高速: テンプレートの準備は 10 分で完了し、PCR 反応はわずか 30 分で完了します。
シンプル: サンプルは切断や粉砕を必要とせずに溶解でき、PCR ミックスは事前に混合された形式であるため、ピペッティングの手順数が削減されます。
節約: 使用する材料の量が少ない。
ハイスループット: 溶解反応は 96 ウェル プレート内で完了できます。
阻害耐性: さまざまな動物や植物のサンプルに対して耐性があります。
ダイレクトPCRキットの実験プロセス
このシリーズの製品は、独自のプロテアーゼ溶解システムを使用してサンプルを溶解します。溶解溶液を直接テンプレートとして使用し、キットに付属の PCR マスター ミックスと組み合わせて遺伝子増幅を行うことができます。
図2 マウス組織の直接PCR実験プロセス
図3 植物組織に対する直接PCR実験のプロセス
ダイレクトPCR製品選択表
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製品シリーズ |
マウスダイレクトPCR第2世代 |
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製品番号 |
10189ES |
10185ES |
10188ES |
10187ES |
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仕様 |
20T/50T/200T/500T |
50T/200T |
20T/50T/200T/500T |
50T/200T |
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特徴 |
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アンプリコンの長さ |
≤5kb |
≤1kb |
≤8kb |
≤1kb |
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延長時間 (s/kb) |
3～20秒 |
30秒 |
≤2 kb: 3～5秒 ≤8 kb: 10秒 |
60秒 |
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適用対象生物 |
マウス、ラット |
マウス、ラット |
人間、ネズミ、ヤギ、ニワトリ、ブタなど。 |
米、トウモロコシ、タバコ、菜種、小麦、大豆など |
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適用可能な組織/材料の種類 |
マウスの尻尾、マウスの耳、足指（筋肉付き）、その他の臓器 |
マウスの尻尾、マウスの耳、足指（筋肉付き）、その他の臓器 |
EDTA、ヘパリン、クエン酸などの一般的な抗凝固剤を含む新鮮な血液、冷蔵（冷凍）血液、 Whatman903®やFTA®などの市販の乾燥血液スポット |
柔らかい葉、古い葉、苗、柔らかい茎 |
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使用例 |
組織: 5 mg マウスの尾: 1-5 mm |
組織: 5～10 mg マウスの尾: 1～5 mm |
全血: 0.5%-20% ワットマン®乾燥血液スポット: 1 mm2 |
葉：1～10 mm 種子：1～3 mm |
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ゲノムリリース時間 |
5～10分 |
15分 |
0～3分 |
0～10分 |
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製品エンド構造 |
鈍端 |
鈍端 |
鈍端 |
鈍端 |
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アニーリング温度 |
温度-(2~5)℃ |
温度-(2~5)℃ |
温度-(1~2)℃ |
温度-(2~5)℃ |
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GC クリッピング範囲 |
29-70% |
30～70% |
30～75% |
40～65% |
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5'-3' エキソヌクレアーゼ活性 |
はい |
はい |
はい |
はい |
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アプリケーション |
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ジェノタイピング |
はい |
はい |
はい |
はい |
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マルチプレックスPCR |
最大5倍 |
最大3～4倍 |
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直接サンプル増幅 |
はい |
はい |
はい |
はい |
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その他の機能 |
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電気泳動インジケーター |
無色 |
青 |
無色 |
青 |
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ホットスタート |
はい |
はい |
はい |
はい |
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プレミックス/キット |
キット（ミックス付き） |
キット（ミックス付き） |
キット（ミックス+バッファー付き） |
キット（ミックス付き） |
製品の利点
改良された Taq DNA ポリメラーゼは、ダイレクト PCR を保証します。阻害剤に対する耐性が非常に優れています。
精製されていないサンプルをテンプレートとして使用すると、PCR 反応を阻害する多くの成分が混入します。通常の PCR 反応システムと Taq DNA ポリメラーゼでは、理想的な結果を得ることが難しく、PCR 増幅を行うことさえ不可能です。このシリーズのキットの PCR ミックスは、改良された Taq DNA ポリメラーゼを使用した、処方が最適化されたプレミックスです。テンプレート DNA への結合能力が向上し、一般的な PCR 阻害剤に対する耐性が高く、テンプレートの適応性が広がります。
図4 Direct PCR KitのPCR Mixは不純物に対する耐性が高くなっています。同じ量のテンプレートを異なるPCR MixでPCRに使用し、さまざまな濃度のPCR反応阻害剤をシステムに追加します。異なる条件下でのPCR産物の量を比較します。
Y EASEN は、さまざまなサンプル向けに一連の製品を開発しました。
- I. げっ歯類特異的タイプ：マウス組織ダイレクトPCRキットプラス（10189ES）
適用サンプル：マウス組織（マウスの尾、マウスの耳、マウスのつま先など）
- 高い増幅効率（長さ、速度、GC互換性）
図 5 マウス組織ダイレクト PCR キット プラスは、さまざまな組織からの溶解物を増幅します。1: プラスミド、2: マウスの耳、3: マウスの尾、4: 肝臓。溶解条件: 70°C で 10 分間溶解、95°C で 5 分間不活性化。ターゲット断片は 1 kb、2 kb、3 kb、6 kb で、伸長時間はそれぞれ 3、5、10、20 秒/kb に設定されています。M: 10510ES60 (YEASEN)。
- 幅広いテンプレート互換性 (10189ES)
図6 マウス組織ダイレクトPCRキットプラスを使用して、ヒト293細胞（1）、唾液（2）、頭皮組織（3）を直接溶解（70°Cで10分間）し、増幅しました。すべてのサンプルで明確なターゲットバンドM：10510ES60（YEASEN）が示されました。
- II. 多種血液ユニバーサルタイプ：血液アドバンスダイレクトPCRキット（10188ES）
- 増幅長は最大8kb
図7 Blood Advanced Direct PCR Kitを使用して、さまざまな長さのDNA断片をヒト全血から直接増幅しました。血液サンプルは、抗凝固剤としてEDTAとともに-20℃で保存しました。血液テンプレート濃度は10％で、伸長時間は10秒/kbに設定されました。M：10510ES60（YEASEN）。
- 高い耐性
図 8 A: Blood Advanced Direct PCR キットは、ヒト EDTA 抗凝固処理全血から直接、GC 含量 71% の 2 kb DNA 断片を増幅するために使用されます。血液テンプレート濃度は 0.5 ～ 50% の勾配で設定され、伸長時間は 10 秒/kb に設定されます。B: Blood Advanced Direct PCR キットは、マウス EDTA 抗凝固処理全血から直接、GC 含量 67% の 2.2 kb DNA 断片を増幅するために使用されます。血液テンプレート濃度は 0.5 ～ 50% に設定され、伸長時間は 10 秒/kb に設定されます。M: 10510ES60 (YEASEN)。
- III. 植物特異的タイプ: 植物組織直接PCRキット (10187ES)
- 複数の種類の植物サンプルで検証済み
図9 異なる種類の植物の葉組織からの直接増幅結果。M：100 bp DNAラダー。C：テンプレートとして対応する植物から精製したゲノムDNA。1-2：テンプレートとしての葉組織ライセート。サイクル数：30サイクル。
顧客事例
- I. マウスの遺伝子型の識別
広州のバイオ企業：
図10 マウスダイレクトPCRキット（10189ES）を使用したマウス尾の増幅。標的遺伝子：500bp、溶解時間：10分、PCR反応システム：25μL、伸長時間：5秒/kb。
- II. イネ遺伝子直接増幅
XX大学
図11 Plant Direct PCR Kit（10187ES）はイネ関連遺伝子の増幅に使用されます。
関連製品
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製品の位置付け |
製品名 |
製品番号 |
製品仕様 |
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高品質アガロース |
10208ES60/76 |
100g/500g |
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核酸染色（紫外線下） |
10202ES76 |
500μL |
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迅速なPCRアップグレード、コロニーPCRが可能で、複雑なテンプレート増幅に適しています |
10167ES03/08 |
1mL/5×1mL |