説明
植物組織直接PCRキットは、PCRによってさまざまな種類の植物の葉を直接増幅できるキットで、幅広い適応性と強力な安定性を備えています。このキットは独自の溶解バッファーシステムを使用しており、さまざまな植物サンプルをすばやく溶解してゲノムDNAを放出します。放出されたゲノムDNAは、PCR反応でタンパク質、RNA、または二次代謝産物を除去することなく、直接テンプレートとして使用できます。また、キットには少量のサンプルが必要で、1 mmの植物の葉でも実験に使用できます。
このキットに付属する 2×Plant Master Mix は、増幅互換性が強く、サンプルの溶解物をテンプレートとして直接使用して、効率的かつ特異的な増幅を行うことができます。この試薬は 2 倍濃縮の PCR 反応混合物で、テンプレートとプライマーを除く PCR 増幅に使用されるすべてのコンポーネントが含まれているため、操作プロセスが大幅に簡素化され、汚染の可能性が低減されます。
このキットは、遺伝子組み換え植物の識別、植物の遺伝子型判定などに使用できます。
配送
商品は保冷剤と一緒に発送されます。
ストレージ
1.試薬10187-A[緩衝液P1]は4℃で1年間保存できます。
2. 試薬10187-B [バッファーP2]は、溶解液を中和するために使用され、サンプルを長期間保存するのに役立ち、4℃で1年間保存できます。
3. 試薬10187-C [2×植物マスターミックス]は-20℃で1年間保存できます。凍結融解の繰り返しは避けてください。
注意事項
1. 葉の実験を行う場合は、採取したばかりの葉組織を使用することをお勧めします。長期凍結組織の場合は、-80°C で保存する必要があります。テンプレートの劣化を避け、PCR 効率に影響を与えるため、凍結と解凍の繰り返しはできるだけ避けてください。葉組織は若い葉に適しています。成熟した葉の場合は、葉の主葉脈の組織を使用しないでください。
2. 最高の増幅効率を得るには、1 kb 以内の長さの断片を増幅することをお勧めします。
3. サンプルを採取するときは、穴あけパンチまたはナイフを使用して適切なサイズのサンプルを採取します。サンプルが異なる場合は、サンプルを処理する前に毎回穴あけパンチまたはナイフを洗浄する必要があります。
4. 葉組織の場合、1〜10 mmの葉を採取することをお勧めします。葉の長さが短すぎるとPCR増幅収率が低下し、長すぎるとPCR反応が阻害されます。植物の葉を処理するには、熱分解、ピペットチップでのマッシュ、グラインダーでの粉砕などの方法を使用します。処理後は、振とうして遠心分離する必要があります。必ず上清を採取して検査してください。沈殿物はPCR反応を著しく阻害します。
5. 安全と健康のため、操作時には白衣と使い捨て手袋を着用してください。
6. この製品は研究目的にのみご使用ください。
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よくある問題 |
考えられる原因 |
ソリューション |
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陽性コントロールおよびテスト対象のサンプルにはバンドはありませんでした。 |
PCR反応システムまたは反応条件が適切ではありませんでした。 |
グラジエント PCR を使用して、PCR に最適な反応条件を探ります。 |
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PCR 試薬を不適切に保管すると、試薬が不活性化されます。 |
2×PCR ミックスは -20℃ で保存し、使用時に凍結と解凍を繰り返さないでください。頻繁に使用する場合は、短期間であれば 4℃ で保存できます。 |
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プライマー設計の問題。 |
プライマーを再設計して確認してください。 |
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陽性コントロールには対象のバンドがあり、テスト対象のサンプルにはバンドがないか、または弱いバンドがあります。 |
溶解バッファーと中和バッファーの比率が不適切であり、溶解混合物が PCR システムの pH 値に影響を与えます。 |
通常の条件下では、中和された溶解混合物の pH は約 7 ～ 8 になります (溶解産物とバッファー P2 は 5:1 の比率に厳密に従って中和する必要があります)。 |
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サンプル溶解混合物が不適切に保管されたか、長期間保管されたため、DNA ゲノムが劣化しました。 |
溶解液ミックスは 4°C で 5 日間保存できます。PCR には新しく調製した溶解液ミックスを使用するようにしてください。 |
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追加されたテンプレートの量が適切ではありません。 |
反応システムの 5% 未満の範囲内で、追加するテンプレートの量を最適化します。 |
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PCRサイクル数が不十分です。 |
PCR サイクル数を適切に増やします。35 ～ 40 サイクルが理想的です。テンプレートの複雑さにより、精製された DNA テンプレートを使用するよりも、PCR 反応を 5 ～ 10 サイクル多く使用する方が一般的に効果的です。 |
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非特異的増幅 |
PCR アニーリング温度が低すぎる、サイクル数、プライマー濃度、またはテンプレート濃度が高すぎる。 |
PCR アニーリング温度を上げ、PCR サイクル数、プライマー濃度、またはテンプレート濃度を下げます。 |
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PCRプライマーが一致しません。 |
PCRプライマーを再設計します。 |
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PCR 反応系を準備する際の温度が高すぎるか、準備後の放置時間が長すぎます。 |
PCR反応系の準備は低温で行い、準備完了後できるだけ早くPCR増幅反応を行う。 |
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ネガティブコントロールにターゲットバンドが現れる |
操作ツールまたは試薬の汚染。 |
実験で使用するすべての試薬や機器はオートクレーブ処理する必要があります。ターゲット配列がサンプルガンに吸い込まれたり、遠心管からこぼれたりしないように、取り扱いには十分注意してください。 |
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サンプル間の相互汚染。 |
各サンプラーは 1 つのサンプルのみに使用します。または、1 つのサンプルを採取した後、サンプラーのブレードを 2% 次亜塩素酸ナトリウム溶液に浸し、繰り返しすすいだ後、きれいなペーパータオルで残留物を乾かします。 |
支払いとセキュリティ
お支払い情報は安全に処理されます。 クレジットカードの詳細を保存したり、クレジットカード情報にアクセスすることはありません
問い合わせ
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よくある質問
この製品は研究目的のみに使用され、人間や動物の治療や診断に使用することを意図したものではありません。製品とコンテンツは、
特定のアプリケーションでは、追加のサードパーティの知的財産権が必要になる場合があります。