説明
Hieff® Blood Advanced Direct PCR Kit は、DNA 精製やサンプル前処理なしで全血サンプルを直接増幅できるキットで、新鮮な血液、冷蔵 (冷凍) 血液、および EDTA、ヘパリン、クエン酸などの従来の抗凝固剤を含む市販の乾燥血液染色に適合しています。このキットには、PCR 阻害剤に対する高い忠実度と耐性を備えた遺伝子組み換え DNA ポリメラーゼの組み合わせ、強力な伸長因子、増幅増強因子、および迅速な伸長条件下で 8 kb のゲノム断片を効率的に増幅し、2 kb 未満の断片に対して 3 ～ 5 秒/kb の伸長時間を設定するように最適化されたバッファー システムを備えた 2× Hieff® Blood Advanced PCR バッファーが含まれており、血液サンプルの識別と検査にかかる時間を大幅に短縮します。
仕様
| フィデリティ（対Taq） | 1 × |
| ホットスタート | はい |
| オーバーハング | 3'-A |
| ポリメラーゼ | Taq DNAポリメラーゼ（品番：10726） |
コンポーネント
|
いいえ。 |
名前 |
10188ES20 |
10188ES60 |
|
10188-A |
2× Hieff ® Blood Advanced PCR バッファー |
500μL |
2.5mL |
|
10188-B |
Hieff ®アドバンスド ハイフィデリティ DNA ポリメラーゼ ミックス |
20μL |
100μL |
|
10188-C |
陽性コントロールプライマーミックス（各10μM） |
100μL |
200μL |
|
10188-D |
10×DNAローディングバッファー |
1mL |
1mL |
説明書
推奨されるPCR反応システム。
|
コンポーネント |
容量（μL） |
|
ddH2O |
50μLまで |
|
2× Hieff ® Blood Advanced PCR バッファー |
25μL |
|
フォワードプライマー（10μM） |
2μL |
|
リバースプライマー（10μM） |
2μL |
|
Hieff ®アドバンスド ハイフィデリティ DNA ポリメラーゼ ミックス |
1μL |
|
血液サンプル |
バツ |
2. プライマーあたりの最終濃度は 0.4 μM が推奨されます。高すぎると非特異的増幅が発生します。
3. 最適な全血テンプレート濃度は 0.5% ～ 20% の範囲で、最初の試験条件として推奨される使用は 10% です。つまり、50 μL の反応システムに 5 μL の全血をテンプレートとして追加し、血栓を吸引しないように注意します。Whatman® フィルター カードに保存された乾燥した血液の汚れについては、血液の汚れが付いた丸い紙片を約 1 mm2 取り、前処理なしで直接 PCR 反応に増幅することができます。
反応プログラム
|
サイクルステップ |
温度。 |
時間 |
サイクル |
|
初期変性 |
95℃ |
5分 |
1 |
|
変性 |
95℃ |
15秒 |
30-35 |
|
アニーリング |
60℃ |
15秒 |
|
|
拡大 |
72℃ |
3～10秒/kb |
|
|
最終延長 |
72℃ |
5分 |
1 |
アニーリング温度は、一般的な Tm 値、またはプライマー Tm 値より 1 ～ 2°C 低い値です。増幅産物の特異性が低い場合は、アニーリング温度勾配を確立して最適なアニーリング条件を見つけることができます。
10 秒/kb の伸長時間で 8 kb 未満のほとんどのターゲット断片を増幅でき、3 ～ 5 秒/kb で 2 kb 未満のほとんどの断片を増幅できます。増幅効率が低い場合は、時間を 20 ～ 30 秒/kb まで適切に延長できますが、60 秒/kb を超えてはなりません。
配送と保管
製品は-15℃～-25℃で1年間保管してください。
数字
注記
1. 血液テンプレートは、総反応量の 10% として使用することをお勧めします。つまり、血栓を吸引しないように注意しながら、全血 5 μL をテンプレートとして 50 μL の反応システムに追加します。
2. 10 秒/kb の伸長時間で 8 KB 未満のほとんどのターゲット断片を増幅でき、3 ～ 5 秒/kb で 2 KB 未満のほとんどの断片を増幅できます。増幅効率が低い場合は、時間を 30 秒/kb まで延長できます。
3. PCR反応後、反応産物を4000rpm（1000×g）で1〜3分間遠心分離して血球断片を沈殿させ、上清を下流の分析に用いることをお勧めします。
4. この製品は医療診断に直接使用することはできません。
5. 安全と健康のため、白衣と使い捨て手袋を着用してください。
支払いとセキュリティ
お支払い情報は安全に処理されます。 クレジットカードの詳細を保存したり、クレジットカード情報にアクセスすることはありません
問い合わせ
あなたも好きかもしれません
よくある質問
この製品は研究目的のみに使用され、人間や動物の治療や診断に使用することを意図したものではありません。製品とコンテンツは、
特定のアプリケーションでは、追加のサードパーティの知的財産権が必要になる場合があります。