グリコプロテオミクスと抗体医薬品研究の急速な発展に伴い、糖鎖修飾も大きな注目を集めています。細胞と細胞、細胞と病原体との接触は主に糖とタンパク質の相互作用によって行われ、糖鎖修飾は複合糖質の接着特性を決定します。IgGでは、Fc領域のAsn297に保存されたN結合型糖鎖もその活性に重要です。また、一部の抗体には追加のNグリカンがあり、Fc領域のAsn297の保存部位とともに、抗体の認識、半減期、免疫応答に影響を与えます。
タンパク質の糖化は、タンパク質の特定の部位で糖鎖が結合する複雑な翻訳後修飾です。糖鎖の種類に応じて、糖タンパク質はN結合型糖タンパク質、O結合型糖タンパク質などに分類されます。また、タンパク質の糖化は、宿主細胞の種類や発酵条件（培地、pH値、温度など）の影響も受けます。そのため、糖タンパク質は通常、糖化部位、糖化レベル、糖鎖の特定の構造など、糖化パターンに不均一性があり、糖鎖の分析と構造特性評価の作業が非常に困難になっています。糖鎖構造情報を最大限に得るために、糖鎖分析の主な戦略は、まずタンパク質から糖鎖を解放し、その後詳細な分析と特性評価を行うことです。この戦略では、効率的で正確で安定した脱糖鎖法が重要です。
脱糖化には現在、酵素法が広く使用されています。N結合型グリカンの場合、一般的に使用される酵素には、PNGase F、Endo H、Endo Sなどがあります。
製品紹介
PNGase F は、糖タンパク質内のほぼすべての N 結合型オリゴ糖を除去する最も効果的な酵素法であり、アスパラギンで結合した高マンノース型、ハイブリッド型、複合型オリゴ糖糖タンパク質を切断し、特に N 結合型グリカンを除去します。切断部位は、最も内側の N-アセチルグルコサミン (GlcNAc) とアスパラギン残基の間のアミド結合であり、酵素加水分解後にタンパク質上のアスパラギンをアスパラギン酸に変換します。
α1-6 フコースが GlcNAc コアに位置する場合、PNGase F も切断できます。α1-3 フコースが GlcNAc コアに位置する場合のみ (植物および昆虫の糖タンパク質に共通)、PNGase F は切断できません。
弊社は従来のPNGase F（カタログ番号20407ES）を提供していますが、従来のPNGase F酵素反応では抗体のN-グリカンを放出するのに数時間かかり、グリカン放出を優先するため、不完全な脱グリコシル化により偏った結果が生じる可能性があり、得られたグリカン分布は治療用抗体の正しい構成を表さない可能性があります。したがって、抗体や抗体融合タンパク質、その他のバイオ治療剤の製造プロセス中のグリコシル化モニタリングには、正確なN-グリカンプロファイルをできるだけ早く取得することが重要です。
Fast PNGase F (カタログ番号 20406ES) は、抗体、免疫グロブリン、融合タンパク質、その他の糖タンパク質を数分で迅速かつ完全に脱グリコシル化できる最適化された組み換え試薬です。この酵素は、すべての N グリカンを迅速かつ優先的に除去でき、下流のクロマトグラフィーまたは質量分析に直接使用できます。
製品の特徴:
高速:数分で完全かつ迅速な脱糖化を実現します。
高純度:プロテアーゼ、グリコシダーゼの混入なし、純度 ≥ 95%。
非選択的:すべての N グリカンを迅速かつ優先的に除去します。
優れた互換性:ダウンストリームクロマトグラフィーまたは質量分析に直接使用されます。
Endo H は、N 型糖タンパク質中の高マンノースおよび一部のハイブリッド型オリゴ糖のキトビオースコア構造を切断し、糖タンパク質から N 結合型高マンノースを除去できる組み換えグリコシダーゼです。
当社は現在、酵母組換え発現Endo H（カタログ番号20414ES）を販売しております。
エンド S は、野生型 IgG 重鎖のキトビオースコア構造間の N 結合糖を切断できる、非常に特異性の高いグリコシダーゼです。グリコシダーゼ S の活性は厳密にはペプチドに依存しないため、X はタンパク質、ペプチド、アスパラギン、または遊離オリゴ糖になります。グリコシダーゼ S は、基質上のコア アルファ 1-6 フコースまたはバイセクティング N-アセチルグルコサミンの存在に関係なく活性です。ただし、3 または 4 アンテナシアリル化および脱シアリル化されたオリゴ糖に対しては不活性です。
当社は現在、大腸菌組換え発現Endo S（カタログ番号20413ES）を販売しております。
購入ガイド
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製品番号 |
20406ES |
20407ES |
20414ES |
20413ES |
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製品名 |
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ソース |
酵母組換え発現 |
酵母組換え発現 |
酵母組換え発現 |
大腸菌 組み換え発現 |
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特定の活動 |
適用できない |
100000U/mL |
1000000U/mL |
8000単位/mg |
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分裂部位 |
ほぼすべてのN結合型グリカン |
ほぼすべてのN結合型グリカン |
N結合型高マンノースグリカン |
IgG重鎖のコア二糖構造内で切断する |
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消化時間 |
10分 |
1～3時間 |
1～3時間 |
1時間 |
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グリコシル化 |
適切な |
適切な |
適切な |
適切な |
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タンパク質構造 |
適切な |
適切な |
適切な |
適切な |
テストデータ
1.高速PNGase Fテスト
1: タンパク質マーカー（Cat#20350ES） 2: 競合品 + 基質または抗体 3: 競合品 + 基質または抗体
4:
2.エンドHテスト
図2. エンドH酵素切断効果（基質）
3.エンドSテスト
製品情報
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製品名 |
製品番号 |
仕様 |
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20406ES20/50 |
20T/50T |
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20407ES01/02 |
15000 U / 75000 U |
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20414ES92/97 |
10000 U /50000 U |
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20413ES80/90 |
1000 U/5 x 1000 U |