ヒエフ・カナス^TM ウラシル+高忠実度DNAポリメラーゼは、Pfu DNAポリメラーゼをベースにした新世代の高忠実度DNAポリメラーゼです。Hieff Canace ^TM ウラシル+高忠実度DNAポリメラーゼは、複雑なテンプレートに対して迅速かつ正確なPCR反応を可能にします。忠実度が大幅に向上し、dUTPを含むプライマー/テンプレート/dNTPの使用による増幅の失敗を完全に回避します。この製品には最適化された酵素バッファーが装備されており、PCR強化コンポーネントが追加されているため、酵素の効率が高く、さまざまなテンプレートに適応でき、複雑なテンプレートの増幅に適しています。

製品構成 

配送と保管

コンポーネントはアイスパックとともに出荷され、-20°C で 1 年間保管できます。

製品アプリケーション

dUTP を含むプライマー/テンプレート/dNTP を使用した高忠実度ライブラリ増幅。

注意事項

1. 安全と健康のため、操作時には白衣と使い捨て手袋を着用してください。

2. 研究目的のみにご使用ください。

説明書

ヒエフ・カナス^TM ウラシル+ High-Fidelity DNA ポリメラーゼは、従来の High-Fidelity 酵素とは少し異なる方法で使用されます。使用前に説明書をよくお読みください。

1. 推奨される反応システム

すべての操作は氷上で実行する必要があります。2×Canace ^TM ウラシル+ PCR バッファーは、解凍後によく混ぜてください。システム構成の前に、PCR 装置を予熱してください。コンポーネントを追加した後、サンプルをピペットでよく混ぜ、チューブの底まで遠心分離し、予熱した PCR 装置に入れて増幅します。使用後は、すべてのコンポーネントを -20 °C に戻して保管してください。

表1.PCR増幅反応

[注記]:

1)試薬：使用前に各成分を十分に解凍してください。

2)テンプレート: 精製された高品質の DNA テンプレートを使用すると、増幅の効率と成功率が大幅に向上します。

3)dNTP: 推奨される最終dNTP濃度は200μMです。キットに含まれるdNTPにはdUTPは含まれていません。特別な状況でdUTPを含むテンプレートを調製する必要がある場合は、最終濃度が400μMになるようにdUTPを追加することができます。

4)ポリメラーゼ濃度: 1 U/50 μL を推奨します。0.5～2 U/50 μL の間で最適化できますが、2 U/50 μL を超えないようにしてください。ポリメラーゼが 3 '→5' エキソヌクリド活性によってプライマーを分解するのを防ぐために、最後のステップでポリメラーゼを反応システムに追加することをお勧めします。

5)Mg2+最終濃度: システムの最終濃度は2 mMです。特別なニーズがある場合は、Mg2+濃度が低いバッファーやMg2+を含まないバッファーの提供を当社に依頼してください。

2. 推奨される反応手順

表2.PCR増幅反応手順

[注意事項]：

1) 初期変性温度と時間: 98℃ が推奨されます。推奨時間は、プラスミド DNA などの単純なテンプレートの場合は 30 秒、ライブラリの場合は 1 分、cDNA やゲノム DNA などの複雑なテンプレートの場合は 3 分、GC 含有量の高いテンプレートの場合は 5 ～ 10 分です。

2) アニーリング温度と時間: 60℃ が推奨されますが、必要に応じて温度勾配を設定してプライマーアニーリングに最適な温度を見つけることもできます。推奨されるアニーリング時間は 20 秒ですが、10 ～ 30 秒の範囲で調整できます。アニーリング時間が長すぎると、増幅産物がゲル上で分散する可能性があります。

3) 延長温度と時間：72℃が推奨されます。延長時間は実際のニーズに応じて調整されます。