説明
製品説明
2×Hieff Canace ™ Plus PCR マスター ミックス (染料入り) は、Hieff Canace ™ Plus High-Fidelity DNA ポリメラーゼ、dNTP、最適化されたバッファー システムを含む、すぐに使用できる 2× プレミックス ソリューションです。このミックスには、室温でポリメラーゼ活性と 3'→5' エキソヌクレアーゼ活性を阻害する 2 つのモノクローナル抗体が含まれており、非常に特異的なホット スタート PCR を可能にします。伸長因子の追加により、最大 13 kb のターゲット フラグメントの長いフラグメント増幅が可能になります。この酵素は、5'→3' DNA ポリメラーゼ活性と 3'→5' エキソヌクレアーゼ活性を示し、その忠実度は Taq DNA ポリメラーゼの 83 倍、通常の Pfu DNA ポリメラーゼの 9 倍です。複雑なテンプレートを増幅し、平滑末端 PCR 産物を生成するのに適しています。
2×Hieff Canace ™ Plus PCR マスターミックス(染料付き)は、シンプルさ、高感度、強力な特異性、優れた安定性などの利点があります。反応システムにはプライマーとテンプレートの追加のみが必要で、2ステップPCRプロトコルを使用して手順を簡素化し、時間を節約できます。製品には電気泳動追跡染料が含まれており、PCR産物を直接ゲル分析にロードできます。さらに、凍結融解サイクルを繰り返した後でも安定した活性を保証する特別な保護剤が含まれています。
仕様
カタログ番号 |
10154ES01 / 10154ES03 / 10154ES08 / 10154ES60 |
サイズ |
100μL / 1mL / 5×1mL / 100×1mL |
ストレージ
この製品は-25〜-15℃で1年間保存する必要があります。
説明書
1.推奨されるPCR反応システム。
コンポーネント |
容量( μL ) |
ファイナル 集中 |
2× Hieff Canace™ Plus PCR マスターミックス(染料入り)* |
25 |
1× |
テンプレート** * |
x |
- |
フォワードプライマー( 10 μmol /L ) ** |
2 |
0.4μmol /L |
リバースプライマー( 10 μmol /L ) ** |
2 |
0.4μmol /L |
ddH2O |
最大50 |
- |
* 1×最終濃度のミックスには、1 U/50 μLのポリメラーゼ、2 mmol/LのMg 2+ 、および200 μmol/LのdNTPが含まれています。
**PCR 反応におけるプライマーの推奨最終濃度は 0.2 ~ 1 μmol/L ですが、0.4 μmol/L が望ましいです。
***25 μL反応システムの場合の推奨テンプレート量:
テンプレートタイプ |
フラグメントサイズ (1 kb-10 kb) |
ゲノムDNA |
50 ng-200 ng |
プラスミドまたはウイルスDNA |
10pg-20ng |
cDNA |
1~2.5μL(PCR総量の1/10を超えない) |
2.反応プログラム。
1) 2 段階プロトコル (推奨):
サイクル ステップ |
温度。 |
時間 |
サイクル |
初期変性 |
98℃ |
3分 |
1 |
変性 |
98 ℃ |
10秒 |
30-35 |
拡大 |
6 8 ℃ |
30秒/KB |
|
最終 拡大 |
72 ℃ |
5分 |
1 |
2) 3ステッププロトコル(従来型):
サイクル ステップ |
温度。 |
時間 |
サイクル |
初期変性* |
98℃ |
3分 |
1 |
変性 |
98 ℃ |
10秒 |
30-35 |
アニーリング** |
60 ℃ |
20秒 |
|
拡大*** |
72 ℃ |
30秒/KB |
|
最終 拡大 |
72 ℃ |
5分 |
1 |
*初期変性: 98°C で 3 分間 (高 GC テンプレートの場合は 5 ~ 10 分) を推奨します。
**アニーリング: 60°C で 20 秒間 (10 ~ 30 秒の間で調整可能) を推奨します。アニーリングが長引くとゲルに汚れが生じる可能性があります。
***伸長: 72°C で 30 秒/kb を推奨 (複雑なテンプレートの場合は最大 60 秒/kb)。
3)勾配アニーリングプロトコル(困難なターゲットに推奨):
サイクル ステップ |
温度。 |
時間 |
サイクル |
初期変性 |
98℃ |
3分 |
1 |
変性 |
98 ℃ |
10秒 |
15(1サイクルあたり1℃低下) |
勾配アニーリング |
70~55℃ |
20秒 |
|
拡大 |
72 ℃ |
30秒/KB |
|
変性 |
98℃ |
10秒 |
20 |
アニーリング |
55℃ |
20秒 |
|
拡大 |
72℃ |
30秒/KB |
|
最終 拡大 |
72 ℃ |
5分 |
1 |
4)さまざまな PCR プロトコルの特徴:
プロトコルタイプ |
スピード |
特異性 |
PCR収量 |
検出率 |
ツーステップ |
最速 |
高い |
中くらい |
高い |
3ステップ |
中くらい |
中くらい |
最高 |
中くらい |
勾配アニーリング |
遅い |
高い |
中くらい |
高い |
注記
1. この製品は研究目的にのみご使用いただけます。
2.安全のため、白衣と使い捨て手袋を着用して作業してください。
支払いとセキュリティ
お支払い情報は安全に処理されます。 クレジットカードの詳細を保存したり、クレジットカード情報にアクセスすることはありません
問い合わせ
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よくある質問
この製品は研究目的のみに使用され、人間や動物の治療や診断に使用することを意図したものではありません。製品とコンテンツは、
特定のアプリケーションでは、追加のサードパーティの知的財産権が必要になる場合があります。