Quick T4 DNA Ligase は、NGS ライブラリ構築プロセスにおける DNA フラグメントとアダプターのライゲーションに使用できる単一酵素製品です。この製品はハイスループット シーケンシングによって検証されており、優れた品質を備えています。実験システムの調整が不要なお客様には、Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module (カタログ番号 12607) の購入をお勧めします。

製品構成

配送と保管

製品は保冷剤とともに出荷され、-20℃で2年間保管できます。

ユニットの定義

20μLのライゲーション反応系において、6μgのλDNA-Hind Ⅲを16℃で30分間反応させたとき、DNA断片の50%以上をライゲーションするために必要な酵素量を1単位（U）と定義した。

注意事項

1. バッファーが溶けているときに少量の沈殿物が発生した場合は、使用前に逆さまにしてよく混ぜてください。

2. 安全と健康のため、操作時には白衣と使い捨て手袋を着用してください。

3. この製品は研究目的にのみご使用ください。

説明書

1. 現在主流の DNA ライブラリ構築キットは、一般的に末端修復および A-Tailing 処理後に精製されず、直接アダプターライゲーションが行われます。反応システムの準備については、以下を参照してください。十分にボルテックスし、軽くスピンし、20°C で 15 分間インキュベートします。

[注意]: *50% PEG 6000はキットに含まれていないため、ご自身でご用意いただく必要があります。

**アダプタの数については次の表を参照してください。

***使用する Quick T4 DNA リガーゼの量は、必要に応じて 1 ～ 5 μL 追加できます。

2. 使用されるアダプターの品質と濃度は、ライゲーション効率とライブラリ収量に直接影響します。アダプターの使用量が多すぎると、アダプター二量体が多く生成され、使用量が少ないと、ライゲーション効率とライブラリ収量に影響する可能性があります。次の表は、このキットを使用してさまざまな入力 DNA 状況で使用するアダプターの推奨量を示しています。

[注]: 入力DNAモル数(pmol)≈入力DNA数(ng)/[0.66 × 入力DNA平均長(bp)]。

アダプターライゲーション計算例: 入力 DNA が 100 ng、長さが 300 bp の場合、追加するアダプターの量はどれくらいですか?

ステップ 1: 入力 DNA のモル数を計算します。式: 入力 DNA モル (pmol)≈ 入力 DNA(ng)/ [0.66 × 入力 DNA 平均長 (bp)]; 入力 DNA モル (pmol)=100 ÷ (0.66×300) = 0.5 pmol;

ステップ 2: 上記の表に従って、追加されるアダプターのモル数を計算します。入力 DNA が 100 ng の場合、アダプター: 入力 DNA のモル比は 100:1 であり、追加されるアダプターのモル数 = 100 × 0.5 pmol = 50 pmol です。

ステップ 3: アダプターの追加量を計算します。アダプターの濃度 = 15 μmol/L (他社のアダプターを使用する場合は、その説明書に従って濃度を決定する必要があります)。追加したアダプターの量 = 追加したアダプターのモル数 (50 pmol) ÷ アダプターの濃度 (15 μmol/L) = 3.34 μL (注: 15 μmol/L = 15 pmol/ μL)。

まとめると、アダプターを追加できる容量は 3.4 μL です。(注: アダプターの最大追加容量は 5 μL を超えません)。