LZCap AU (3'Acm) は cap1 類似体です。この製品は 5'AU3' の初期配列で転写に使用され、Cap1 転写キャッピングによって天然の cap1 構造が生成されます。従来のキャッピング方法で生成された Cap0 と比較して、CapAU (3'Acm) によって生成された cap1 構造により、SaRNA は体内でより高い活性と翻訳効率を持ちます。

米国特許承認済み。

コンポーネント

製品詳細

LZCap ^® DNAテンプレート設計

LZCap ^® AU(3'Acm)はAG開始配列に適しています。下図に示すように、T7プロモーター(下線部)とそれに続くAG配列は効果的に転写を開始できます。

プロトコル

実験に必要な成分を氷上で解凍します。

室温での転写システムを構築するには、以下の反応システムを参照してください。

修飾 N1-Me-pUTP は、野生型 UTP の代わりに使用できます。修飾 N1-Me-pUTP は、mRNA の免疫原性を低下させます。Henovcom は、修飾ヌクレオチド N1-Me-pUTP (カタログ番号: HN1002) も提供できます。

注:

1) LZCap ^® AU(3'Acm)は、5'AU 3'開始配列を持つT7プロモーター転写ベクターに適しているため、ベクターの構築時に考慮する必要があります。

2) 実験で使用する試薬、消耗品、容器にはRNase汚染がないこと。

3) 転写には線状化された DNA テンプレートを使用することをお勧めします。

4) 野生型ヌクレオチドの代わりに修飾ヌクレオチドを使用した場合、反応の最終濃度は変化しませんでした。

5) PCR産物を転写開始DNAテンプレートとして使用すると、DNAテンプレートの量を半分に減らすことができます。

調製した反応溶液を混合し、軽く遠心分離し、37℃で2〜3時間インキュベートする。転写産物の長さが100nt未満の場合は、反応時間を4〜8時間に延長する。

一般的な安全性プロファイル

ストレージ

この製品は-25～-15℃で2年間保存できます。

予防

1. 安全と健康のため、この製品を操作するときは、実験着や使い捨て手袋などの個人用保護具 (PPE) を着用してください。
2. 研究目的のみにご使用ください。
   

よくある質問

1. LZCap はどのように設計するのですか?

酵素は比較的「特異的」な基質認識を持っています。そのため、新しいキャップ構造を設計する際には、特許目的で新しい構造変更が必要ですが、他方では、天然/既知の構造との類似性を可能な限り維持するよう努めています。天然構造にはリボース 3' OH があり、これは変更可能です (例: メチル化)。この考慮に基づいて、特許の新規性のために 3' 位置に炭素を追加し、続いて OH の水素結合を模倣するために NH を追加し、次に NH の塩基性を減らして水素結合能力を高めるためにアセチル基を追加することを選択しました。LzCap の活性は、おそらく水素結合の増加により、メチル化された天然キャップよりも優れています。メチル基やメトキシ基と比較して、アセチルアミノ基は、基質 (キャップ) と開始因子 (酵素) 間のファンデルワールス相互作用も増加させる可能性があります。

2. アセチルアミノ基は安定していますか?

アセチルアミノ基はすでに十分に安定しています。キャップの最も不安定な部分である 7-メチル化位置とホスホジエステル結合よりもはるかに安定しています。

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