Hifair ^™ Advanced One Step RT-qPCR Kit は、SYBR Green I 色素をベースにした蛍光定量キットです。遺伝子特異的プライマーを使用することで、逆転写と qPCR 反応が 1 本のチューブで完了するため、キャップを開けたりピペッティングしたりする操作を繰り返す必要がなくなり、アッセイ効率が大幅に向上し、汚染のリスクが軽減されます。RNA サンプルの場合、このキットは耐熱性の Hifair ^™ V 逆転写酵素を使用して効率的な cDNA 合成を行い、UNICON ^™ HotStart Taq DNA ポリメラーゼを使用して定量増幅を行います。最適化されたバッファー システムでは、キットの感度は、高度に発現したターゲットでは 0.1 pg、中程度に発現したターゲットでは 1 pg まで高くすることができ、DNA サンプルの増幅と定量にも適しています。このキットは DNA サンプルの増幅と定量に適しています。さまざまな植物や動物のサンプル、細胞、微生物からの核酸を高感度で検出し、定量することができます。

仕様

コンポーネント

ストレージ

この製品は-25〜-15℃で保管してください 光から離れて 1年。

説明書

1. 反応 システム 構成*****

* 低 Rox モデルおよび Rox 補正なしのモデルは、上記の反応システムに従って直接調製されます。高 Rox モデルを使用する場合は、Hieff™ SP High Rox を 2 x Hifair™ Advanced SG バッファーに 1:250 v/v で加え、よく混ぜてから遠心分離します。Hieff™ SP High Rox を含む 2× Hifair ^™ Advanced SG バッファーは、低 Rox および Rox 補正なしのモデルの使用には影響しません。

** 最終的なプライマー濃度は 0.2 μmol/L でしたが、必要に応じて 0.1 ～ 1 μmol/L の間で調整することもできます。

*** この試薬は非常に感度が高く、総RNAは1 pg～1 μgの範囲にあり、ヒトサンプルのテストでは、全体のCt値が15～30の範囲になるように適切に制御して、1 pg～100 ngの最適入力が示されました。

**** 標的遺伝子増幅の妥当性と再現性を確保するため、20 μL または 50 μL の使用をお勧めします。

***** 超クリーンベンチで準備し、ヌクレアーゼ残留物のないチップと反応チューブを使用してください。フィルターカートリッジ付きのチップが推奨されます。交差汚染とエアロゾル汚染を避けてください。

2）反応プログラム

*逆転写温度は、実験のニーズに応じて 50 ～ 55°C の間で選択できます。DNA サンプルの場合、逆転写プロセスを省略できます。

** 特別な場合には、プライマーの Tm 値に応じてアニーリング/伸長温度を調整できますが、60°C が推奨されます。

3）対象機種

Rox キャリブレーションを必要としない機器モデル:

Bio-Rad: CFX96、CFX384、iCycler iQ、iQ5、MyiQ、MiniOpticon、Opticon、Opticon 2、Chromo4;

エッペンドルフ：マスターサイクラー ep realplex、realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q、Rotor-Gene 3000、Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480、LightCycler2.0、LightCycler 96;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler、Cepheid: SmartCycler、Illumina: Eco qPCR、

Low Rox 適用モデル:

ABI 7500、7500 Fast、ViiA7、QuantStudio 3 および 5、QuantStudio 6、7、12k フレックス。

ストラタジーン MX3000P、MX3005P、MX4000P;

High Rox 適用モデル*:

ABI 5700、7000、7300、7700、7900HT Fast、StepOne、StepOne Plus。

* High Roxモデルの場合、Hieff™ SP High Roxを2倍のHifair ^™に比例して追加する必要があることに注意してください。 使用前にAdvanced SG Bufferを使用してください。

注記

1. この製品は研究目的にのみご使用いただけます。
2. 安全のため、白衣と使い捨て手袋を着用して作業してください。

ドキュメント:

マニュアル