Hieff Superfast DNA メチル化亜硫酸塩キット (カラムベース) は、DNA サンプル内のメチル化されていないシトシンをウラシルにすばやく変換しますが、メチル化されたシトシンは変更しません。高温亜硫酸塩処理中、二本鎖 DNA は一本鎖に変性します。HSO3- の存在下では、シトシン残基は脱アミノ化されてウラシルに変換されますが、メチル化されたシトシンは変更されません。その後の PCR 増幅で、ウラシルはチミン (T) に置き換えられます。変換プロセスはわずか 5 分で完了し、100 pg から 2 μg の範囲の DNA 入力に対応し、メチル化されていないシトシンの変換効率は 99% 以上です。変換された DNA は、PCR 増幅や NGS シーケンシングなどの下流アプリケーションに適しています。

特徴

低入力: 100 pgから2 μgまでのサンプルの変換に適しています

変換時間は短く、約 5 分です。

サンプルの損傷は最小限: 変換後のサンプルの完全性を良好に維持します。

高い変換効率:変換率 ≥ 99%、高 GC 領域で高い変換率と低い誤検出率。

単一細胞 DNA メチル化変換などの希少サンプルに適しています。

RNAサンプルのメチル化変換が可能です。

製品構成

注記：

1 箱あたり 10 回のテストの場合: 洗浄液に無水エタノール 4.4 mL を追加します。

1 箱あたり 50 回のテストの場合: 洗浄液に無水エタノール 22 mL を追加します。

無水エタノールを加えた後、逆さまにしてよく混ぜ、後で使用するために保管します。試薬の性能に影響を与える可能性のあるエタノールの蒸発を防ぐため、ボトルのキャップがしっかりと閉まっていることを確認してください。

形

図 4. ヒトゲノム DNA サンプルの亜硫酸水素塩変換は、12225 および競合他社の Q 変換キットの両方を使用して実行されました。その後、メチル化特異的な一本鎖 DNA ライブラリ調製キットを使用してライブラリを作成しました。ライブラリ収量と品質管理データは上記に示されています。結果は、12225 および競合他社の Q キットの両方からプールされたライブラリをシーケンスすると、12225 キットの方がデータ出力が高く、オンターゲット率 (%) が高く、重複率 (%) が低いことを示しています。

配送と保管

12225-A 変換溶液は、光を避けて室温で保管してください。その他のコンポーネントは室温で保管してください。保存期間は 12 か月です。

注記：

1. 下流の実験を成功させるには、変換ステップで入力 DNA の総量を正確に定量します。DNA の定量には、A260/A280 比が 1.7 ～ 1.9 の Qubit 3.0/4.0 を使用することをお勧めします。入力 DNA の範囲は 100 pg ～ 2 μg で、最適な範囲は 100 ng ～ 1 μg です。DNA 入力が不十分だと下流の検出が妨げられる可能性があり、入力が多すぎると回収率と変換効率が低下する可能性があります。

2. 変換液、脱スルホン化液、洗浄液には揮発性成分が含まれていますので、使用後は速やかにキャップを締め、常温で保管してください。

3. 変換後のサンプルについては、すぐに下流の実験を進めてください。短期保存の場合は -20°C で、長期保存の場合は -80°C で保管してください。

4. 安全と健康のため、操作中は白衣と使い捨て手袋を着用してください。

5. この製品は研究目的にのみご使用ください。

説明書

試薬および消耗品の準備: 1.5 mL 滅菌遠心チューブ、酵素を含まない水、無水エタノール、PCR チューブ。

l亜硫酸水素塩変換:

1) 検査するサンプル数に応じて対応する滅菌PCRチューブを準備し、次の表に従って反応システムを準備します。

2) 変換システム

ピペットを使用して上記のシステムを吹き飛ばして混ぜるか、ボルテックスして5秒間混ぜた後、短時間遠心分離し、反応溶液をPCRチューブの底に遠心分離します。

v 注意：1.このとき、PCRチューブ内の反応溶液の総量は200μLです。変換をより完全にするために、ステップ2）で吹き込みと混合を行った後、反応溶液を等分し、新しい滅菌PCRチューブに移し、変換手順を実行する必要があります。変換後、2つのPCRチューブの反応溶液を同じ精製カラムにまとめて精製します。

2. サンプル量が 20 ～ 40 μL の場合は、変換溶液の量を減らして総量を 200 μL に保ちます。

3. サンプル量が50μLの場合、変換溶液150μLを加え、総量を200μLに維持し、変換時間を6〜10分に延長します。

3) CT変換プログラムの設定

PCR チューブは、反応を実行するための事前設定されたプログラムを備えた PCR 装置に配置されます。

l浄化

1)変換溶液200μLを精製カラムに移し、 13000gで30 ～ 60秒間遠心分離し、濾液を捨て、精製カラムを再びコレクションチューブに戻します。

2)精製カラムに洗浄バッファー100μLを加え（無水エタノールが加えられていることを確認してください）、 13000gで30～60秒間遠心分離し、濾液を捨て、精製カラムをコレクションチューブに入れます。 また;

3)精製カラムに脱スルホン化バッファー200μLを加え、室温で20分間放置します。反応後、13000gで30～60秒間遠心分離し、濾液を捨て、精製カラムを再びコレクションチューブに戻します。

4)精製カラムに洗浄バッファー200μLを加え、 13000gで30～60秒間遠心分離し、濾液を捨て、精製カラムを再びコレクションチューブにセットします。

5) 手順 4) を 1 回繰り返します。

6)精製カラムを準備した1.5mL遠心管に移し、カバーを開けて乾燥させた後、フィルター膜の中央に10～30μLの溶出バッファーを加え、室温で1分間放置し、13000gで1分間遠心分離してDNAを回収する。

7) DNAを一時的に-20℃で保存します。長期保存の場合は、 DNAを-80℃で保存し、不必要な凍結融解の繰り返しを避けてください。

注意: 精製された形質転換産物は、後続の PCR 反応またはシーケンシング プロセスで直接使用できます。

マニュアル