ハイフNGS™ ワンポットフラッシュDNAライブラリー準備キットは、迅速な酵素DNAライブラリーキットで、 DNA 断片化用の高品質酵素が含まれており、DNA 断片化、末端修復、dA テーリングを 1 つのステップに統合することで、ライブラリの準備にかかる時間とコストを大幅に削減します。

このライブラリ準備キットは、一般的な動物、植物、微生物などの 100 pg ～ 500 ng のサンプルと互換性があります。

1本のチューブでDNA断片化、末端修復、Aテール付加反応を迅速に実現します。このキットはアダプターとプライマーと組み合わせる必要があり、イルミナと互換性があります。 およびMGI ハイスループット シーケンシング プラットフォーム。

特徴

1) 100 pg～500 ngのゲノムDNAサンプルに適しています。

2 ）イルミナと互換性あり およびMGI ハイスループット シーケンシング プラットフォーム。

3 ）断片化、末端修復、Aテーリング 内部の反応 5分。

4 ）効率的なライブラリー変換率と増幅効率。

仕様

コンポーネント

注: * は、この試薬がこのキットに含まれておらず、追加の試薬が必要であることを示します。このキットは、 Illumina と MGIのデュアル プラットフォームと互換性がありますが、追加のプライマー ミックス (MGI 用 CAT # 13334 プライマー ミックスと Illumina 用 CAT # 13335 プライマー ミックス) が必要です。

ストレージ

この製品は-25～-15 ℃で1年間保管してください。 年。

数字

図1. 10種類の微生物のDNAの検出

ライブラリは、 Cat#12316プロトコル、 ZymoBIOMICS微生物コミュニティDNA標準（Zymo Research® #D6306）10 ngを使用して準備されました。ライブラリはプールされ、Illumina（ SE75 ）でシーケンスされました。シーケンスデータは20Mにホモジェナイズされました。 両方の入力レベルで、予想される組成と検出された組成を比較しました。特定の微生物 gDNA の検出は、予想される組成と一致していました。予想される組成: クリプトコッカス・ネオフォルマンス 2%、サッカロミセス・セレビシエ 2%、枯草菌 12%、大腸菌 12%、エンテロコッカス・フェカリス 12%、ラクトバチルス・ファーメンタム 12%、リステリア・モノサイトゲネス 12%、緑膿菌 12%、黄色ブドウ球菌 12%、サルモネラ・エンテリカ 12%。

操作について

1.安全のため、白衣と使い捨て手袋を着用して作業してください。

2. 成分を室温で解凍します。解凍後、ボルテックスでよく混ぜ、チューブを軽く回転させて、後で使用するために氷上に置いておきます。

3.各ステップで反応溶液を調製する際は、ピペットを使用して吹き込み、均一に混ぜるか、軽く振ることをお勧めします。激しく振ると、ライブラリの出力が低下する可能性があります。

4.サンプルの相互汚染を避けるため、フィルターエレメント付きのガンヘッドの使用をお勧めします。異なるサンプルを吸引する場合は、ガンヘッドを交換してください。

5. 各反応ステップは、加熱蓋付きのサーモサイクラーで実行することをお勧めします。サーモサイクラーは、使用前に設定温度まで予熱しておく必要があります。

6. 不適切な操作はエアロゾル汚染を引き起こし、結果の精度に影響を与える可能性が非常に高くなります。PCR 反応混合領域と PCR 産物精製アッセイ領域を物理的に分離することを必須とすることをお勧めします。ライブラリ構築用の特殊なピペットなどの機器を備えています。

7. この製品は研究目的にのみご使用ください。

DNAの断片化について

1. このキットの適合範囲は 100 pg ～ 500 ng の入力 DNA です。可能な限り、A260/A280 = 1.8 ～ 2.0 の高品質の入力 DNA を使用してください。

2. 入力 DNA に高濃度の金属イオンキレート剤またはその他の塩が含まれている場合、その後の実験に影響を及ぼす可能性があります。DNA を ddH2O または Tebuffer (10 mm トリス-HCl、pH 8.0-8.5、0.1 mM EDTA) で希釈することをお勧めします。

3. ほとんどの高品質ゲノム DNA の消化時間は表 1 に示されています。このキットは優先度が低く、GC 含有量のさまざまなテンプレートを許容できます。

表1. 従来のゲノムDNA断片化の推奨時間

アダプターライゲーション

1.アダプターの濃度はライゲーション効率とライブラリー収量に直接影響します。アダプターを過剰に使用するとアダプターダイマーが多く生成され、低用量では 結紮 効率とライブラリ収量。表2と表3に推奨量を示します。 このキットを使用して、さまざまな入力 DNA に対応するアダプター。

表2. 推奨イルミナ 異なる入力DNAに対するアダプター量

表3. 推奨されるMGI 異なる入力DNAに対するアダプター量

ライブラリの拡張

増幅サイクル数は厳密に制御する必要があります。増幅が不十分だとライブラリ収量が低下する可能性があります。増幅が多すぎると、バイアス、エラー、重複読み取り、キメラ産物の増加につながる可能性があります。表4 1 μgのライブラリ収量を目標とした推奨サイクル数をリストします。

表4. 100 pg-500 ng入力DNAの推奨サイクル

ビーズベースのDNAクリーンアップとサイズ選択

1 .ライブラリ構築プロセスには、DNA 精製磁気ビーズを必要とするステップが複数あります。DNA 精製とサイズ選択には、Hieff NGS ™ DNA 選択ビーズ (Yeasen Cat#12601) または AMPure ™ XP 磁気ビーズ (Beckman Cat#A63880) をお勧めします。

2 .磁性ビーズは使用前に室温で平衡化する必要があります。そうしないと、収量が減少し、サイズ選択効果に影響が出ます。

3.磁気ビーズは使用前にボルテックスまたはピペッティングでよく混合する必要があります。

4 .上清を移す際にビーズを吸引しないでください。微量のビーズでもその後の反応に影響を与える可能性があります。

5 . 80%エタノールは新しく調製する必要があります。そうでないと回収効率に影響します。

6 .磁気ビーズは、生成物を溶出する前に室温で乾燥させる必要があります。乾燥が不十分だと、残留エタノールが後続の反応に影響を与えやすくなります。乾燥しすぎると、磁気ビーズが割れて精製収率が低下します。通常、室温で 3 ～ 5 分間乾燥させると、ビーズが完全に乾燥します。

7 .必要に応じて、 0.1 × TE緩衝液で溶出した精製またはサイズ選択されたDNAサンプルは、 4°Cで1〜2週間、または-20°Cで1か月間保存できます。

ライブラリ品質分析

1. 構築されたライブラリの品質は、通常、濃度とサイズ分布を測定することによって分析されます。

2. ライブラリ濃度は、Qubit や PicoGreen などの蛍光ベースの方法や qPCR によって測定できます。

3. NanoDrop などの吸光度ベースの定量化方法の使用は推奨されません。

4. ライブラリの定量化には qPCR 法を使用することをお勧めします。Qubit や PicoGreen などの蛍光ベースの方法では、不完全な dsDNA 構造 (アダプターのない挿入物、または片方の端のみがアダプターで連結された挿入物) を完全なライブラリと区別できません。qPCR 法では、両端がアダプターで連結された完全なライブラリ (シーケンス可能なライブラリ) のみを増幅して測定するため、ローディングのより正確な測定が可能になります。

5. ライブラリのサイズ分布は、Agilent Bioanalyzer またはキャピラリー電気泳動やマイクロ流体の原理に基づくその他のデバイスを使用して分析できます。

ドキュメント:

安全データシート

1 2316 _MSDS_HB 250211 _EN.PDF

マニュアル

12316_マニュアル_Ver.EN 20241225.pdf