製品説明

Hieff NGS™ mRNA Isolation Master Kit は、mRNA 精製専用の磁気ビーズ キットです。mRNA キャプチャ ビーズは、オリゴ dT (ポリ A) テールと結合したマイクロメートル サイズの常磁性マイクロスフィアで、ポリ A テールを持つ mRNA に結合して、10 ng から 4 μg の完全な RNA から mRNA を分離するために使用できます。

仕様

コンポーネント

ストレージ

製品は2～8℃で1年間保存し、凍結は避けてください。

説明書

1. 必要な材料は含まれていません

磁気ラック、ヌクレアーゼフリーPCRチューブ

2. 手術

1) mRNA キャプチャービーズを室温で平衡化します (約 30 分)。

2) ヌクレアーゼフリーPCRチューブで10 ng～4 μgの総RNAをヌクレアーゼフリー水で50 μLに希釈し、氷上に置きます。

3) 磁気ビーズを上下逆さまにしたりボルテックスしたりして混ぜます。磁気ビーズ 50 μL を全 RNA サンプル 50 μL に加え、ピペットで 6 回回してよく混ぜます。チューブの底まで軽くスピンダウンします。

4) 磁気ビーズと RNA の混合物をサーマルサイクラーでインキュベートし、次のプログラムを実行します: 65°C、5 分、25°C、5 分、25°C、保持。

5) チューブを磁気ラックに5分間置いて、mRNAを全RNAから分離します。上清を慎重に除去します。

6) チューブを磁気ラックから取り出し、200 μL のビーズ洗浄バッファーで磁気ビーズを再懸濁します。全量をピペットで 6 回上下させてよく混ぜます。チューブを磁気ラックに 5 分間置き、上清を慎重に取り除きます。

7) 手順 6 を繰り返します。

8) チューブを磁気ラックから取り出し、50μLのトリス緩衝液を加えて磁気ビーズを再懸濁し、ピペットで6回動かしてよく混ぜます。

9) サンプルをサーマルサイクラーに入れ、次のプログラムを実行して mRNA を溶出します: 80°C、2 分、25°C、保持。

10) サンプルをサーマルサイクラーから取り出し、ビーズ結合バッファー 50μL を加え、ピペットで 6 回繰り返してよく混ぜます。

11) 室温で5分間インキュベートし、mRNAが磁気ビーズに結合できるようにします。

12) チューブを磁気ラックに5分間置き、上清を慎重に取り除きます。

[注意]: 残った液体を吸引するには10μLのピペットが必要です。

13) チューブを磁気ラックから取り出し、200 μL のビーズ洗浄バッファーで磁気ビーズを再懸濁し、ピペットで 6 回繰り返してよく混ぜます。チューブを磁気ラックに置き、室温で 5 分間放置します。上清をすべて取り除いて廃棄します。

14) mRNA最終溶出

スキームA:予備転写反応の場合

チューブを磁気ラックから取り出します。12μLのヌクレアーゼフリー水を加え、ピペットで6回繰り返してよく混ぜます。チューブをサーマルサイクラーに置き、次のプログラムを実行します：80°C、2分。次に、すぐにチューブを磁気ラックに置き、室温で5分間放置します。溶液が澄んだら、上清10μLを別の新しいヌクレアーゼフリーPCRチューブに慎重に吸引します。

スキームB : RNAライブラリの準備

ライブラリ構築用の関連キットの指示に従って、適切な量の Frag/Primer Buffer を追加します。

注記

1. 安全と健康のため、操作時には白衣と使い捨て手袋を着用してください。
2. 研究目的のみにご使用ください。
3. 磁気ビーズを使用する前に必ず室温まで温めてよく混ぜてください。そうしないと、サンプルの回収効率に影響が出る可能性があります。
4. 操作では、RNase および核酸の汚染が絶対にないようにする必要があります。
5. 本製品を他の試薬と併用する場合は、それぞれの実験手順に従って操作してください。
6. 良好な精製結果を得るには、全 RNA の完全性が良好で、RIN 値が 7.0 を超えていることを確認する必要があります。