グロビン mRNA 除去プローブ (ヒト) は、ヒトグロビン mRNA を除去するように設計されています。HBA1 /2、HBB、HBD、HBM、HBG1/2、HBE1、HBQ1、HBZ など、成人、幼児、胎児のソースからグロビン mRNA を効果的に除去できます。この製品は、Hieff NGS TM MaxUp rRNA 除去キット (ヒト/マウス/ラット) (Yeasen#12253) と併用して、^総RNA から rRNA とグロビン mRNA を効果的に除去します。このキットは、無傷の RNA サンプルと分解した RNA サンプルの両方に適しています。rRNA とグロビン mRNA を除去した後の RNA サンプルは、mRNA と非コーディング RNA のハイスループット シーケンス分析に使用できます。これにより、シーケンス結果の有効データの割合が大幅に向上し、cDNA 合成やその他の下流アプリケーションが可能になります。

製品アプリケーション

100 ng ～ 1 μg の総 RNA サンプル (ヒト、マウス、ラットの血液リソース) および完全な RNA サンプルと部分的に分解された RNA サンプルの両方に適しています。

製品構成

配送と保管

すべての部品はドライアイスとともに出荷され、-20°C で 1 年間保管できます。

形

合計 500 ng と 100 ng のヒト血液全 RNA から、それぞれ rRNA 除去と rRNA とグロビンの複合除去を実施しました。ライブラリの構築と配列決定後、グロビン mRNA の含有量を比較しました。

注意事項

1. RNase 汚染のない消耗品を使用し、実験エリアを定期的に清掃してください。RNase 汚染を除去するには、ThermoFisher の RNAZap ^TM高効率核酸除去スプレーの使用をお勧めします。

2. RNA サンプルにはゲノム DNA の汚染があってはなりません。サンプルに gDNA が残っている場合は、使用前に DNase I で消化し、精製する必要があります。

3. RNA サンプルの最大入力量は 10 μL です。サンプル量が多い場合は、最初に濃縮することができます。

4.安全と健康のため、操作時には白衣と使い捨て手袋を着用してください。

5.研究目的のみにご使用ください。

説明書

1. RNAへのプローブハイブリダイゼーション

1.1 PCR チューブで、10 ng～1 μg の全 RNA をヌクレアーゼフリー水で最終容量 10 μL まで希釈します。RNA を氷上に保管します。

1.2 氷上で以下のRNA/プローブハイブリダイゼーション反応を組み立てる 表1に従って。

 表1 RNA/プローブハイブリダイゼーション反応

1.3 ピペッティングで少なくとも 10 回上下させてよく混ぜます。チューブをマイクロ遠心分離機で軽く回転させて、チューブの側面から液体を集めます。

1.4チューブをサーモサイクラーにセットし、加熱蓋を 105°C に設定して表 2 のプログラムを実行します。

表2 RNA/プローブハイブリダイゼーションの反応プログラム

2. RNase H消化

2.1 表 3 に従って、氷上で次の RNase H 消化反応を組み立てます。

表3 RNase H消化反応

2.2ピペッティングで少なくとも 10 回上下させてよく混ぜます。チューブをマイクロ遠心分離機で軽く回転させてチューブの側面から液体を集めます。

2.3チューブをサーモサイクラーにセットし、次のプログラムを実行します：蓋を50°C、37°C​​、30分、4°Cで保持。

3. DNase I消化

3.1 表4に従って、氷上で次のDNase I消化反応を組み立てます。

表4 DNase Ⅰ消化反応

3.2 ピペッティングで少なくとも 10 回上下させてよく混ぜます。チューブをマイクロ遠心分離機で軽く回転させてチューブの側面から液体を集めます。

3.3チューブをサーモサイクラーにセットし、次のプログラムを実行します：蓋を外し、37°C​​、30分、4°C、保持。

4. RNAの精製

4.1 Hieff NGS ^TM RNAクリーナー（カタログ番号12602）を室温に戻して、使用前にボルテックスでビーズを完全に再懸濁します。

4.2ステップ3.3のRNA溶液に110µL（2.2×）のビーズを加え、ピペッティングで少なくとも10回上下させてよく混ぜます。

4.3 室温で5分間インキュベートしてRNAをビーズに結合させます。

4.4 チューブを磁気スタンドに置き、ビーズを上清から分離します。溶液が透明になったら（約 3 分）、上清を捨てます。ピペットのチップがビーズに触れないように注意してください。

4.5 チューブを磁気スタンドに置いたままにします。チューブに新しく調製した 80% エタノール 200 µL を加えます。室温で 30 秒間インキュベートし、上清を捨てます。ピペットのチップがビーズに触れないように注意してください。

4.6 手順 4.5 をもう 1 回繰り返して、合計 2 回洗浄します。

4.7 10 µL ピペットチップで残留エタノールを除去します。チューブを磁気スタンドに置き、蓋を開けた状態でビーズを最大 5 分間空気乾燥させます。

4.8 チューブを磁気スタンドから取り外します。11 μL のヌクレアーゼフリー水を加えてビーズから RNA を溶出します。ピペッティングで少なくとも 10 回上下させてよく混ぜ、チューブを軽く回転させます。

4.9 室温で 5 分間インキュベートします。溶液が透明になるまでチューブを磁気スタンドに置きます (約 3 分)。

4.10 上清10µLをヌクレアーゼフリーチューブに移します。

注意: この時点で停止する必要がある場合は、サンプルを -80°C で保存できます。