説明
ハイエフ™ 多用途T4 DNAリガーゼは、T4 DNAリガーゼの変種です。この酵素は、凝集分子または平滑末端分子間の連結反応を触媒するのに適しています。次世代シーケンシング(NGS)のライブラリ準備プロセス中にDNA断片とアダプターを接続するために設計された単一酵素製品です。Hieff® Versatility T4 DNA リガーゼは、ハイスループット シーケンシングを通じて広範囲に検証されており、優れた品質を示します。
特徴
- 高忠実度
- 耐熱性
仕様
| ソース | 組み換え大腸菌 |
| ストレージ バッファ | 50 ミリ トリスHC1,100 mM KC1,0.1 mM EDTA、1 mM DTT、50%グリセロール、pH 7.5士0.2 @25℃ |
| ユニットの定義 | 20μLのライゲーション反応系において、λDNA-Hind III 6μgを16℃で30分間反応させたときに、DNA断片の50%以上のライゲーションを触媒するのに必要な酵素量を1活性単位（U）と定義する。 |
コンポーネント
| コンポーネント | 名前 |
12996ES60 60KU |
12996ES62 600KU |
| 12996-A | ハイフ® 多用途T4 DNAリガーゼ（600 U/µL） | 100μL | 1000μL |
| 12996-B | 10×T4 DNAリガーゼバッファー | 500μL | 3×1500μL |
ストレージ
この製品は-25〜-15℃で2日間保管してください。 年。
形
この酵素と他のトップクラスの耐熱性および従来の T4 DNA リガーゼとの性能比較データについてお問い合わせいただくには、メッセージを残してください。
注記
1.安全のため、白衣と使い捨て手袋を着用して作業してください。
2.バッファー内に少量の沈殿物が発生する場合、これは正常な現象です。バッファーを逆さまにしてよく混ぜてから使用してください。
3.この製品は研究目的にのみご使用ください。
プロトコル
1.現在主流のライゲーションベースのDNAライブラリー調製キットは、通常、末端修復およびA-テーリング後の精製ステップを必要としません。DNA断片は精製せずに直接アダプターライゲーションにかけられます。このキットは、主流のライゲーションベースの方法と互換性があります。 シームレスなアダプターライゲーション用の市販の末端修復および A テーリング システム。
氷上のマイクロ遠心管に次の反応液をセットし、ピペッティングまたは振とうで穏やかに混合し、軽く遠心分離し、20°C で 15 分間加熱して不活性化します。
表1. アダプターライゲーションの反応系
|
成分 |
容量（ μL ） |
最終濃度 |
|
dA 末端 DNA |
60 |
1× |
|
10×T4 DNAリガーゼバッファー |
10 |
0.1 μM-0.5 μM |
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50% PEG6000 |
12* |
1 ng -400 ng |
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DNAアダプター |
5** |
|
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3〜5*** |
|
|
|
ヌクレアーゼフリー水 |
上 100まで |
- |
【注意】 *50% PEG6000溶液はキットに含まれていないため、ご自身で用意する必要があります。
**表を参照してください 2 のために アダプタの量。
***T4 DNA リガーゼの量は必要に応じて 3 ～ 5 μL ずつ追加できます。
2.アダプターの濃度はライゲーション効率とライブラリー収量に直接影響します。アダプターを過剰に使用すると、 で アダプターダイマーはより多く、使用率が低いと接続効率とライブラリ生成に影響する可能性があります。表2 入力 DNA の量に応じて推奨されるアダプターの量をリストします。
表2. 100 pg-1 μg入力DNAに対する推奨アダプター量
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入力DNA |
集中 |
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0.1 ng |
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1 ng |
0.5μM |
|
10 ng |
1μM |
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25 ng |
2μM |
|
100 ng～1000 ng |
10μM |
【注意】：アダプターの容量 上記の表の要件に応じて調整できます。
支払いとセキュリティ
お支払い情報は安全に処理されます。 クレジットカードの詳細を保存したり、クレジットカード情報にアクセスすることはありません
問い合わせ
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よくある質問
この製品は研究目的のみに使用され、人間や動物の治療や診断に使用することを意図したものではありません。製品とコンテンツは、
特定のアプリケーションでは、追加のサードパーティの知的財産権が必要になる場合があります。