説明
Hifair™スーパー逆転写酵素は次世代の逆転写酵素です、 どれの だったん改良された M-MLV 由来。この酵素は RNase H 活性を欠き、熱安定性が大幅に向上しており、最大 70°C の反応温度に耐えます。複雑な二次構造を持つ RNA テンプレートの効率的な逆転写に非常に適しています。
アプリケーション
この製品は、RT-PCR、RT-qPCR、RT-LAMP、RNA-seq、cDNA合成実験に適しています。逆転写反応温度は最大70°Cに達します。
ユニットの定義
酵素活性の 1 単位 (U) は、ポリ (A).オリゴ (dT) をテンプレートプライマーとして使用し、37°C で 10 分以内に 1 nmol の dTTP を酸不溶性物質に組み込むために必要な酵素の量として定義されます。
成分
| 成分 | 名前 | 14612ES92 | 14612ES93 |
| 14612 | ハイフェア™ スーパー逆転写酵素（200 U/μL） | 50μL | 250μL |
保管条件
-25˚C ～ -15˚C で最大 18 か月間保存できます。
使用方法
ファーストストランドcDNA合成手順
1. RNA 変性 (オプションのステップ)
1. RNA の変性により二次構造が開き、第一鎖 cDNA の収量が大幅に向上します。
| 成分 | 音量 |
| RNaseフリーddH2O | 13μLまで |
| オリゴ(dT)18 (50 μM) またはランダムプライマー (50 μM) または遺伝子特異的プライマー (2 μM) | 1μL |
| テンプレートRNA | トータル RNA: 10 pg ～ 5 μg または mRNA: 10 pg ～ 500 ng |
· 65℃で5分間加熱し、その後氷上で2分間急冷します。
· 軽く遠心分離して反応液を回収し、以下に示すように逆転写反応混合物を加えます。
2. 逆転写反応セットアップ（20 μL システム）
| 成分 | 音量 |
| 前のステップからの反応混合物 | 13μL |
| 5×反応バッファー | 4μL |
| dNTP ミックス (10 mM) | 1μL |
| Hifair® スーパー逆転写酵素 (200 U/μL) | 1μL |
| RNase阻害剤（40 U/μL） | 1μL |
3. 逆転写プログラムの設定
| 温度 | 時間 |
| 25°C* | 5分 |
| 50～70℃ | 15〜30分 |
| 85°C** | 5分 |
*ランダムプライマーを使用する場合は、25°Cで5分間インキュベートします。オリゴ(dT)18または遺伝子特異的プライマーを使用する場合は、この手順を省略できます。
85°C で 5 分間加熱すると逆転写酵素が不活性化され、必要に応じて調整できます。
逆転写産物は、後続の PCR または qPCR 反応にすぐに使用することも、-20°C で短期保存することも、凍結融解サイクルを避けるために小分けした後、-80°C で長期保存することもできます。
予防
1. 清潔な実験環境を維持し、清潔な手袋とマスクを着用してください。汚染を防ぐために、すべての実験消耗品が RNase フリーであることを確認してください。
2. RNA の劣化を防ぐため、すべての操作を氷上で実行してください。
3. 効率的な逆転写を確実に行うために、高品質の RNA サンプルを使用します。
4. この製品は研究目的にのみご使用いただけます。
5. 安全と健康のため、製品を取り扱う際は白衣と使い捨て手袋を着用してください。
ドキュメント:
支払いとセキュリティ
お支払い情報は安全に処理されます。 クレジットカードの詳細を保存したり、クレジットカード情報にアクセスすることはありません
問い合わせ
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よくある質問
この製品は研究目的のみに使用され、人間や動物の治療や診断に使用することを意図したものではありません。製品とコンテンツは、
特定のアプリケーションでは、追加のサードパーティの知的財産権が必要になる場合があります。