説明
ArCas12a は、 Agathobacter rectalis細菌の CRISPR システムに由来し、Cpf1 としても知られる、1263 個のアミノ酸からなる単量体タンパク質です。CRISPR/Cas システムのクラス II (タイプ V) メンバーである ArCas12a は、単一のエフェクタータンパク質のみで機能し、T が豊富なモチーフを標的にすること、トランス活性化 crRNA を必要としないこと、DNA 二本鎖切断時に粘着末端を生成すること、RNA 処理に関与すること、DNA ヌクレアーゼ活性を有することなど、Cas9 との大きな違いを示します。
ArCas12aはHNHドメインを欠いており、RuvCドメインを単独で利用して、CRISPR RNA（crRNA）の誘導下で標的核酸の5'末端にあるチミン（T）に富むPAM領域を認識し、標的DNAの切断を開始することができます。多くの哺乳類や植物のゲノム編集に成功しています。さらに、ArCas12aはトランス切断活性を示し、反応系内の非標的一本鎖DNA（ssDNA）を無差別に切断することができます。
ArCas12a は他の LbCas12a/AsCas12a と比較して、より高い温度適応性 (25-55 o C ) を示し、ゲノム編集や核酸検出アプリケーションに適しています。
特徴
広い反応温度範囲：25～55 ℃の温度範囲内で切断活性を示す
ヌクレアーゼ残留が少ない：エキソヌクレアーゼ、ニッカーゼ、RNaseが残留していない
シス切断活性：in vitroでの二本鎖DNAの非常に効率的な切断
トランス切断活性：核酸検出に適した高いトランス切断活性
アプリケーション
CRISPR/Cas遺伝子編集
CRISPR/Casシステムに基づく診断と検出
等温核酸増幅技術（RPAおよびLAMP）などと組み合わせたその他の検出アプリケーション
仕様
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ソース |
アガトバクター・レクタリス由来のCpf1遺伝子は、大腸菌での組み換え発現によって発現される。 |
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分子量 |
149KDa |
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PAMシーケンス |
TTTN または TTTV |
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反応条件 |
50 mM NaCl、10 mM Tris-HCl、10 mM MgCl 2 、pH 7.9 @25 o C |
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集中 |
10μM |
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純度 |
>95% ( SDS-PAGE ) |
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不活性化条件 |
85 ℃ 、 5～ 10分 |
コンポーネント
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コンポーネント番号 |
名前 |
14702ES65 |
14702ES80 |
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14702-A |
ArCas12aヌクレアーゼ（ 10μM ） |
10 0μL |
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14702-B |
10 × ArCas12a反応バッファー |
1mL |
1mL |
配送と保管
この製品は-25〜-15℃で2年間保管する必要があります。
数字
形 1. ArCas12a シス切断活性の試験: M: マーカー; C: テンプレート二本鎖 DNA (dsDNA)
注: crRNA の誘導により、dsDNA (600 bp) を効率的に切断して 2 つの断片 (200 bp + 400 bp) を生成できます。
図2. ArCas12aトランス切断活性試験結果
注: dsDNA をターゲットとして使用し、ArCas12a、crRNA、および ssDNA レポーター プローブ (蛍光レポーター グループを含む) を in vitro 切断用に追加しました。ArCas12a が crRNA およびターゲット DNA と複合体を形成すると、トランス切断活性が活性化され、ssDNA レポーター プローブが切断され、蛍光を発します。
ドキュメント:
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1 4 702 _MSDS_ Ver.EN202412 05 .pdf
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