説明
ハイフェアTM ライオレディ IマルチプレックスワンステップRT-qPCRキット( UDG plus)は、RNAをテンプレートとするマルチプレックス定量PCRキットです。実験の過程で、逆転写と定量PCRが同じチューブ内で行われるため、実験操作が簡素化され、汚染のリスクが軽減されます。独自のバッファーと酵素設計により、ワンステップRT-qPCR凍結乾燥反応システムの準備と製品設計に使用できます。
このキットでは、耐熱性HifairTM逆転写酵素によって第一鎖cDNAが効率的に合成され、 UniconTM HotStart Taq DNAポリメラーゼによって定量的に増幅されます。キットには主に、最適化された凍結乾燥バッファー、酵素ミックスなどが含まれています。さらに、非特異的PCR増幅を効果的に抑制し、複数のqPCR反応の増幅効率を向上させる因子が追加されており、増幅効率を確保し、最大複数の増幅反応を実行できます。
このキットには凍結乾燥に使用できる凍結保護剤が付属しています。
仕様
コンポーネント番号 |
16645 ES 6 0 / 16645 ES 8 0 / 16645ES92 |
サイズ |
100トン / 1000トン/ 10000 トン |
コンポーネント
名前 |
16645 ES60 (100T) |
16645 ES80 (1,000トン) |
16645 ES92 (10,000トン) |
|
16645 -A |
4×Hifair TMリヨバッファ |
600μL |
6mL |
60mL |
16645 -B |
ハイフェアTM ライオ酵素ミックス |
100μL |
1mL |
10mL |
16645-C |
凍結保護剤 |
800μL |
8mL |
80mL |
ストレージ
の 製品は-25℃~-15℃で1年間保存してください。凍結と解凍を繰り返すことは避けてください。
説明書
1. 反応組成:
コンポーネント |
容量( μL) |
最終濃度 |
4×Hifair TMリヨバッファ |
6 |
1× |
ハイフェアTM ライオ酵素ミックス |
1 |
- |
凍結保護剤 |
8 |
- |
プライマーミックス(10μM) |
1 |
|
プローブミックス(10μM) |
0.5 |
0.05~0.5μM |
テンプレートRNA |
5 |
- |
デポジットH 2 O |
25まで |
- |
注意:使用前に必ずよく混ぜ、激しい振動による過度の泡立ちを避けてください。
2.最適化されたサイクリングプロトコル
(1)標準的な増幅手順
反応段階 |
温度 |
時間 |
サイクル |
|
1 |
逆転写 |
50° C |
1 |
|
2 |
初期変性 |
95℃ |
5分 |
1 |
3 |
増幅反応 |
95℃ |
|
45サイクル |
60 ℃ |
30秒 |
(2)迅速な増幅プログラム
|
反応段階 |
温度 |
時間 |
サイクル |
1 |
逆転写 |
50° C |
2分 |
1 |
2 |
初期変性 |
95℃ |
2秒 |
1 |
3 |
増幅反応 |
95℃ |
|
45サイクル |
60 ℃ |
13秒 |
注記:
a) 逆転写:温度は42℃または50℃で10〜15分選択できます。
b) 増幅反応:設計されたプライマーのTm値に応じて温度を調整します。
c) 蛍光信号の取得: 機器マニュアルの要件に従って実験手順を設定してください。
3.応用 装置
Rox搭載機器: ABI 5700、7000、7300、7700、7900HT Fast、StepOne™、StepOne Plus™
Low Rox搭載機器: ABI 7500、7500 Fast、ViiA™7、 QuantStudio™ 3および5、QuantStudio™ 6、7、12k Flex
ストラタジェン MX3000P™、MX3005P™、MX4000P™
ロックスなしの装備:
Bio-Ra d CFX96™、CFX384™、iCycler iQ™、iQ™5、MyiQ™、MiniOpticon™、Opticon®、Opticon® 2、Chromo4™
エッペンドルフマスターサイクラー® ep realplex、realplex 2 s、キアゲンコルベット ロータージーン® Q、ロータージーン® 3000、ロータージーン® 6000
ロシュ・アプライド・サイエンスライトサイクラー® 480、ライトサイクラー® 2.0、ライトサイクラー® 96
サーモサイエンティフィック ピコリアル サイクラー、セフェイドスマートサイクラー®、イルミナエコ qPCR
注記
健康と安全を確保するために、白衣や手袋などの必要な個人用保護具を着用してください。
実験にはRNaseフリーの消耗品を使用してください。
この製品は研究用途にのみご使用ください。
凍結乾燥手順
このキットは凍結乾燥に直接使用できますが、これに基づいてさまざまなプライマーの賦形剤をさらに検討することもできます。この試薬の標準的な凍結乾燥手順は次のとおりです。
プロセス |
温度 |
時間を設定する |
間隔 |
真空 mbar |
前凍結乾燥 |
-45℃ |
10分 |
60分 |
—— |
凍結乾燥の初期段階 |
-45℃ |
10分 |
60分 |
0.01ミリバール |
-40℃ |
10分 |
900分 |
0.01ミリバール |
|
-35℃ |
10分 |
60分 |
0.01ミリバール |
|
-30℃ |
20分 |
60分 |
0.01ミリバール |
|
-20℃ |
20分 |
60分 |
0.01ミリバール |
|
0℃ |
20分 |
60分 |
0.01ミリバール |
|
圧力上昇試験 |
||||
分析乾燥段階 |
5℃ |
10分 |
20分 |
0.01ミリバール |
10℃ |
10分 |
20分 |
0.01ミリバール |
|
15℃ |
10分 |
20分 |
0.01ミリバール |
|
20℃ |
10分 |
20分 |
0.01ミリバール |
|
25℃ |
10分 |
240分 |
0.01ミリバール |
|
圧力上昇試験 |
支払いとセキュリティ
お支払い情報は安全に処理されます。 クレジットカードの詳細を保存したり、クレジットカード情報にアクセスすることはありません
問い合わせ
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よくある質問
この製品は研究目的のみに使用され、人間や動物の治療や診断に使用することを意図したものではありません。製品とコンテンツは、
特定のアプリケーションでは、追加のサードパーティの知的財産権が必要になる場合があります。