説明
Hieff NGS™ DNA 選択ビーズは、SPRI (固相逆固定化) 原理に基づいて調製されており、次世代シーケンシング (NGS) ライブラリの調製中の DNA 精製およびサイズ選択に適用できます。Hieff NGS™ DNA 選択ビーズは、さまざまな DNA および RNA ライブラリ調製キットと互換性があり、AMPure ビーズの優れた代替品です。
コンポーネント
| コンポーネント番号 | 名前 | 12601ES08 | 12601ES56 | 12601ES75 |
| 12601 | Hieff NGS™ DNA選択ビーズ | 5mL | 60mL | 450mL |
仕様
| 製品ライン | DNA洗浄および選択ビーズ |
| 出発物質 | DNA |
| 互換性 | DNA |
| 絶縁技術 | 磁気ビーズ |
| 最終製品タイプ | DNA |
| 用途（アプリケーション） | DNAセランアップ、DNAサイズ選択 |
配送と保管
ビーズは保冷剤と一緒に発送され、2°C〜8°Cで1年間保管できます。
説明書
- 1. 準備
使用前に選択ビーズを室温で少なくとも 30 分間平衡化します。
- 2. DNAサイズの選択
サイズ選択の操作フローを図 1 に示します。プロトコルは次のとおりです。
図1. DNAサイズ選択のフローチャート
2.1 使用する前に毎回、ボルテックスまたはピペッティングでビーズをよく混ぜます。
2.2 サンプルに最初の選択ビーズを加えます（表 1 を参照）。ボルテックスまたはピペッティングで少なくとも 10 回上下させてよく混ぜます。
2.3 室温で5分間インキュベートします。
2.4 チューブを軽くスピンダウンし、磁気スタンドに置きます。溶液が透明になったら（約 5 分）、上清を新しい PCR チューブに移します。
2.5 表 1 に従って、ステップ 2.4 のサンプルに 2 回目の選択ビーズを追加します。少なくとも 10 回ボルテックスまたはピペッティングで完全に混合します。
2.6 室温で5分間インキュベートします。
2.7 チューブを軽くスピンダウンし、磁気スタンドに置きます。溶液が透明になったら（約 5 分）、上清を吸引して捨てます。
2.8 チューブを磁気スタンドに置いたまま、ビーズを乱さないように、新しく調製した 80% エタノール 200 μL を加え、室温で 30 秒間インキュベートします。エタノールを吸引して捨てます。
2.9 手順 2.8 をもう一度繰り返して、合計 2 回洗浄します。
2.10 10 µL ピペットチップで残留エタノールを除去します。チューブを磁気スタンドに置いたまま、蓋を開けた状態で選択ビーズをひび割れが現れるまで（約 5 分）空気乾燥させます。
注意: 選択ビーズを乾燥させすぎないでください。DNA ターゲットの回収率が低下する可能性があります。
2.11 チューブを磁気スタンドから取り外し、適量の ddH2O (≥20 µL) を加え、少なくとも 10 回ボルテックスまたはピペッティングでよく混ぜます。
2.12 室温で5分間インキュベートする。
チューブを軽くスピンダウンし、磁気スタンドに置きます。溶液が透明になったら（約 5 分）、上清 20 μL を新しいチューブに移します。
- 3.DNAサイズ選択の推奨条件
子牛胸腺 DNA を超音波処理により断片化して 100 ～ 1,000 bp の断片を調製し、表 1 に従って 2 回のサイズ選択を実行しました。結果は Agilent 2100 Bioanalyzer を使用して分析しました (図 2)。
表1. DNAサイズ選択の推奨条件
| DNA断片の長さ | 250-350bp | 320-420bp | 450-550bp | 550-700bp | 700-900bp | 800～1,000年前 |
| ビーズとDNAの比率（第1ラウンド） | 0.80× | 0.70× | 0.60× | 0.55× | 0.50× | 0.45× |
| 第2ラウンドのビーズとDNAの比率 | 0.20× | 0.20× | 0.20× | 0.15倍 | 0.15倍 | 0.15倍 |
注: 表中の「×」はサンプル DNA の容量を示します。たとえば、ライブラリの挿入長が 250 bp でサンプル DNA の容量が 100 μL の場合、1 回目の分類で使用する磁気ビーズの容量は 0.80×100 μL=80 μL、2 回目の分類で使用する磁気ビーズの容量は 0.20×100 μL=20 μL です。
図2. Agilent 2100高感度DNAチップの電気泳動図
注:
1. 安全と健康のため、操作時には白衣と使い捨て手袋を着用してください。
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