磁気残留 DNA サンプル調製キットは、さまざまな生物学的サンプル中の残留 DNA の前処理に適しています。独自の磁気ビーズと慎重に最適化されたバッファー システムを使用することで、サンプル中の微量の宿主細胞残留 DNA の分離と精製を最大限に行うことができます。

磁気残留 DNA サンプル調製キットは、CHO 宿主細胞 DNA 残留検出キット (カタログ番号 41301ES)、HEK293 宿主細胞 DNA 残留検出キット (カタログ番号 41302ES)、Vero 宿主細胞 DNA 残留検出キット (カタログ番号 41303ES)、および E.coli 宿主細胞 DNA 残留検出キット (カタログ番号 41304ES) を含むさまざまな宿主細胞残留 DNA 検出キットで使用できます。

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製品構成

配送と保管

1. パート I はアイスパックとともに出荷され、1 年間は 4°C、長期保管の場合は -20°C で保管されます。

2. パート II は室温で出荷され、室温で 1 年間保存されます。

3. パート III はドライアイスで出荷され、-20°C で 1 年間保管されます。

4.商品を受け取ったら、パートI、パートII、パートIIIの3つのコンポーネントが揃っているかどうかを確認し、対応する保管温度ですぐに保管してください。

注意事項

1. ご使用前に取扱説明書をよくお読みになり、取扱説明書に厳密に従って操作してください。サンプル処理はクリーンベンチまたは生物学的安全キャビネットで行うことをお勧めします。

2. 室温で保管した溶液に沈殿物や濁りがないか注意してください（特に冬場など室温が低い場合）。使用効果に影響を与えないように、溶液が透明になるまで 37°C の水浴に浸してください。

3. 溶出中に磁性ビーズが残留する可能性があるため、サンプルを採取する際には磁性ビーズを吸引しないようにしてください。

4. この製品を使用する際は、交差汚染を避けるためにチップを頻繁に交換してください。

5. 安全と健康のため、本製品を操作するときは、実験着や使い捨て手袋などの個人用保護具 (PPE) を着用してください。

6. この製品は研究目的にのみご使用ください。

事前準備

1. 自分で用意する機器：ボルテックスシェーカー、ウォーターバスまたはメタルバス、遠心分離機、磁気分離ラック、杭州 Aosheng Auto-Pure32A 自動核酸抽出装置、またはその他のブランドの全自動核酸抽出装置。

2. ご自身で用意する消耗品: 10μL～1000μL 低吸着フィルターチップ、1.5 mL 低吸着遠心チューブ、PCR チューブまたは 96 ウェルプレート、および対応するチューブキャップまたはメンブレン。

3. 自家調製試薬：無水エタノール（分析グレード）、1×PBS緩衝液（pH 7.4、MgおよびCaイオンを含まない）、超純水。

4. 初めて使用するときは、ラベルまたは説明書に指定された量の無水エタノールを洗浄液A*と洗浄液B*のボトルに加え、使用前によく混ぜて、よく印を付けてください。使用後はボトルのキャップをしっかりと閉め、ボトル内のエタノールレベルを維持してください。

残留DNAの手動抽出

1. サンプル処理

1.1 サンプルにワクチンなどの比較的高い DNA 含有量が含まれている場合は、1×PBS バッファー (pH 7.4、Mg イオンと Ca イオンを含まない) で適切な割合に希釈してから抽出してください (サンプルの希釈は、検出値が標準曲線の直線範囲内になるようにし、検出の精度を確保するためです。通常は 100 倍希釈が考えられます)。

1.2 試験するサンプルが乾燥粉末の場合は、使用前に超純水で10 mg/mLまたは100 mg/mLに希釈してください。

1.3 サンプルに複雑なマトリックスが含まれている場合は、適切な希釈率を決定するために標準添加および回収実験を実行する必要があります。

2. 1.5 mL チューブに 100 μL のサンプルを加え、次に 100 μL の溶解バッファー、10 μL のプロテアーゼ K を加え、ボルテックスして 10 秒間混合します。

[注記]: タンパク質サンプルの濃度が0～100 mg/mLの場合は10 μLのプロテアーゼKを加え、タンパク質サンプルの濃度が100～200 mg/mLの場合は20 μLのプロテアーゼKを加えます。

3. 60℃で20分間インキュベートします。

4. 次に、結合溶液 400 μL、グリコーゲン 9 μL、ポリ A カリウム塩 6 μL を加え、ボルテックスしてよく混ぜます。

5. 磁気ビーズを20μL加え、ボルテックスでよく混ぜ、10分間放置します。3分ごとに10秒間ボルテックスで混ぜてください。

[注意]：磁気ビーズが完全に再懸濁されるように、使用前に磁気ビーズをボルテックスする必要があります。一度に4〜5回サンプルを追加した後、再度混合することをお勧めします。

7. 軽く遠心分離して溶液を落とし、遠心管を磁気ラックに 1 ～ 2 分間置きます。磁気ビーズが完全に吸収されたら、液体を慎重に取り除きます。

8. 洗浄液Aを500μL加え（使用前に無水エタノールが加えられているかどうかを確認してください）、振るかボルテックスで混ぜて、磁気ビーズが分散し、遠心管の壁に磁気ビーズが凝集していないことを確認します。

9. 軽く遠心分離し、遠心管を磁気ラックに1～2分間置きます。磁気ビーズが完全に吸収されたら、液体を慎重に取り除きます。

10. 洗浄液 B を 500 μL 加え (使用前に無水エタノールが加えられているかどうかを確認してください)、振るかボルテックスで混ぜて、磁気ビーズが分散し、遠心管の壁に磁気ビーズが凝集していないことを確認します。

11. 軽く遠心分離し、遠心管を磁気ラックに 1 ～ 2 分間置きます。磁気ビーズが完全に吸収されたら、液体を慎重に取り除きます。

12. 残留液が可能な限り除去されるように、チューブを 10 秒間素早く遠心分離し、磁気ラックに置き、10 μL ピペットを使用して残留液を吸引します。

13. チューブのキャップを開け、エタノールが完全に蒸発するまで室温で 3 分間放置します。磁気ビーズの表面に反射やひび割れが現れなければ、エタノールが完全に蒸発したことがわかります。

14. チューブを磁気スタンドから取り出し、65°C で予熱した溶出液 50～100 μL を加え、よく振って混ぜます。その後、軽く遠心分離し、65°C で 5 分間インキュベートし、2～3 分ごとに振って混ぜます。

15. 再度軽く遠心分離し、遠心管を磁気スタンドに 2 分間置きます。磁気ビーズが完全に吸着されたら、DNA 溶液を慎重に新しい遠心管に移し、-20°C で保存します。長期保存の場合は -80°C で保存します。