このキットには強力な溶解バッファーが装備されており、サンプル（細胞、マウスの尾、マウスの耳、マウスのつま先、筋肉など）をすばやく溶解してゲノムDNAを放出し、溶解物を精製せずにPCR反応システムに直接追加できるため、操作が便利です。また、このキットに必要なサンプル入力は少なく、マウス組織5 mgまたはマウスの尾1〜5 mmを実験に使用できます。

コンポーネント

ストレージ

19697-A（溶解液）は、 2〜8℃の場合 1年。複数回使用する場合は、交差汚染を防ぐために別々のパッケージで冷凍してください。 19687-B（停止液）は、 -25〜-16℃の場合 1年。

説明書

マウスゲノムDNAのリリース

1. 5～10 mg の動物組織または 1～5 mm のマウスの尾を 1.5 mL の遠心管* に切り取ります。
2. 上記の遠心管に 90 μL のバッファー ML を加え、サンプルに溶解液が完全に浸透するように軽くボルテックスし、軽く遠心します。
3. 恒温インキュベーター**で95°Cで15分間インキュベートします。
4. 10 μL の Buffer MT を加え、軽く振って混ぜ、溶解を終了します。
5. オプションの手順: 12000 rpm で 2 分間遠心分離します。
6. 上清を新しい遠心管に移し、4°C または -20°C で保存するか、上清を直接取り出して次の PCR 増幅に使用します。

* 溶解反応がよりスムーズに進むように、組織は可能な限り細かく切断する必要があります。

** 95°C で 15 分間インキュベーションすれば、ほとんどの PCR のニーズに十分対応できます。大量の DNA が必要な場合やサンプルの溶解が難しい場合は、時間を 30 分まで延長できます。組織ブロックを完全に溶解する必要はなく、残留物はその後の遠心分離ステップで除去できます。

細胞ゲノムDNAの放出

48 ウェル プレートでトランスフェクトされた細胞を 3 日間培養し、細胞密度が約 70,000 細胞/ウェルに達したら、培地を可能な限り完全に除去します。次に、ウェルごとに ML バッファーを 90 ul 直接追加し、各ウェルをピペットで移します。すべてを 96 ウェル PCR プレートに移します。PCR 装置で 95 °C で 5 ～ 15 分間処理して冷却した後、MT バッファーを 10 ul 追加し、均一かつ徹底的に吹き付けます。高忠実度酵素 (Cat# 10164) または Taq 酵素を使用して、PCR 反応システム 50 ul ごとに 0.5 ～ 2 ul の細胞溶解液を追加し、PCR を実行します。

図 1. 19697 で処理した細胞溶解物による直接 PCR。

注記

1. この製品は研究目的にのみご使用いただけます。
2. 安全のため、ゴーグル、白衣、使い捨て手袋を着用して操作してください。
3. サンプル間の相互汚染を避けるために、各サンプル採取後に、採取装置の端またはサンプルと直接接触する部分を 2% 次亜塩素酸ナトリウム溶液に浸し、数回洗浄した後、残留液を清潔なペーパータオルで乾かしてから再度使用する必要があります。テストの利便性のために、複数の採取装置を用意し、使用後に均一に洗浄して、各サンプルが汚染のない採取装置で採取されるようにすることができます。
4. 新鮮に採取した動物組織の使用をお勧めします。長期凍結組織の場合は、凍結と解凍を繰り返すことをできるだけ避けてください。そうしないと、テンプレートの劣化につながり、PCR 効率に影響します。

ドキュメント:

マニュアル