コンカナバリンA（ConA）ビーズは、コンカナバリンAと共有結合した超常磁性ポリマーミクロスフェアである。 （穀物植物の種子から単離された植物マンノース/グルコース結合レクチン）が表面に付着している。これらのビーズ ConA は、単分散性や強力な磁気反応性など、いくつかの注目すべき特性を備えています。Ca ²⁺および Mg ²⁺イオンが存在する場合、ConA 磁性ビーズは、ConA グロブリン A と末端の α-D-マンノースおよび α-D-グルコース基との親和性を利用して、多糖類、糖タンパク質、糖脂質などのさまざまな生体分子を効率的かつ迅速に分離および精製できます。

ConA 磁気ビーズは、細胞を分離または固定するための便利な方法を提供し、その後の洗浄ステップでの細胞損失を最小限に抑えます。さらに、核の収集と固定にも使用できます。さらに、これらのビーズは、ChIP-seq 実験で使用される革新的なアプローチである CUT & Run や CUT & Tag などの革新的な技術にも役立ちます。

要約すると、ConA 磁気ビーズは、生体分子の効率的な精製、細胞の便利な分離と固定、核の収集、最先端の実験技術への応用のための強力なツールです。

仕様

特徴

図表

表 1. Yeasen ConA ビーズは捕捉率が高い。マイクロスフィアに比例して使用されるコンカナバリン A (ConA) の量は、CUT&Tag 実験で細胞結合後に磁気ビーズが過度に凝集するのを防ぎながら最大の結合容量を確保することが検証されています。たとえば、10 μL の ConA コーティング ビーズを使用すると、E7 レベルに相当する量の細胞を結合でき、結合効率は 98% を超えます。

図 1. Yeasen ConA ビーズは高い分散性を示します。ビーズのラベリング プロセスでは、バッチ間の変動の影響を受けずに効率的に密閉できるように、非生物学的シーラントが選択されました。これにより、磁性ビーズの優れた密閉が保証され、ConA コーティング ビーズの保管中に高い単分散性が維持されます。これは、その後の実験で炭水化物分子に効率的に結合するのに役立ちます。

図 2. Yeasen Con A ビーズを使用した CUT&Tag クロマチン信号分布。

ストレージ

この製品は2～8℃で2年間保存してください。

説明書

以下の操作は、糖タンパク質の精製や細胞の分離を例に挙げています。 カット＆タグ 実験 プロトコルについては Yeasen Cat# 12598ES を参照してください。

1. バッファーの準備

1）顧客提供

1. 含まれていない必要な材料：マグネットスタンド、エッペンドルフチューブ、PCRチューブ、マグネットスタンド、サーモサイクラーなど。
2. ビーズを室温で少なくとも 30 分間平衡化します。ボルテックスまたはボトルを振ってビーズを完全に再懸濁します。

1. サンプルの取り扱い（ 哺乳類細胞を例に挙げると ）

1. 哺乳類細胞（1.0×10 ⁴ ～1.0×10 ⁵細胞）を準備し、遠心分離（4℃、600×g、3～5分）し、慎重に 上清を捨てます。
2. 140μLの結合緩衝液を加え、よく混ぜて細胞を再懸濁し、遠心分離して回収する（4℃、600×g、3〜5分）。 上清を捨てます。
3. 90 μL の結合バッファーを加え、よく混ぜて細胞を再懸濁します。
   注意: しっかりと接着した哺乳類細胞は、トリプシンなどの酵素を使用して部分的な消化を行うことで得られます。動物組織、植物細胞、または真菌細胞の場合、分散した細胞またはプロトプラストを得るには、多くの場合、それぞれの特性に合わせた特別な処理が必要です。

1. ConAビーズを準備する

1. ConAビーズをピペットで静かに完全に懸濁し、10 新しい 200 μL 遠心チューブにビーズ懸濁液 1 μL を入れます。
2. 40 μLの結合バッファーを加え、よく混ぜて磁気スタンドに1分間置き、磁気ビーズが遠心管の側壁に吸着した後、上清を捨てます。
3. 10 μL の結合バッファーを加え、よく混ぜて ConA ビーズを再懸濁します。

1. サンプルバインディング

1. 準備した細胞サンプルを前処理したビーズに加え、再懸濁したビーズを静かにピペットで移し、倒立ミキサーでインキュベートします（室温で 30 分または 4℃ で一晩）。
2. 磁気スタンドに1分間置いて、磁気ビーズが遠心管の側壁に吸着するのを待ち、上清を慎重に捨てます。
3. 細胞-ConAビーズ複合体に500μLの溶出バッファーを加え、 ピペットで優しく ビーズを再懸濁し、 磁気スタンドに1分間置いて、磁気ビーズが遠心管の側壁に吸着するのを待ち、上清を慎重に捨てます。
4. 手順 3) をさらに 3 ～ 4 回繰り返します。

1. 溶出

1. 糖タンパク質の場合、50〜250μLの溶出バッファーを加え、再懸濁したビーズを静かにピペットで移し、倒立ミキサーでインキュベートします（室温で10〜30分間）。倒立混合後、磁気スタンドに1分間置き、上清を新しい1.5mLチューブに集めてSDS-PAGEまたはウェスタンブロットを行います。
2. 細胞の場合、溶出する必要はありません。

注記

1. 平衡をとる 使用前にConAビーズを室温に戻します。
2. 凍結は避けてください。凍結するとビーズ材料が劣化したり、活性が失われることがあります。
3. ConA が活性化するには Ca2+ イオンと Mn2+ イオンの存在が必要であるため、実験中は EDTA やその他の金属イオンキレート剤を含む試薬を避ける必要があります。
4. ConA ビーズは細胞とともにインキュベートすると凝集することがありますが、これは正常であり、磁気ビーズの通常の使用には影響しません。
5. この製品は研究目的にのみご使用いただけます。
6. 安全のため、白衣と使い捨て手袋を着用して作業してください。

マニュアル