強化ECL化学発光基質キットは、直接または間接的に西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）で標識された抗体および関連抗原を検出するために設計されています。強化ECL化学発光基質キットの原理は、タンパク質または核酸が電気泳動後にインプリントされた膜に転写され、膜上の標的タンパク質がHRPで標識された一次抗体および二次抗体に結合されるか、膜上の核酸がHRPで標識されたプローブによって直接または間接的に結合されることです。膜を洗浄した後、製品で調製したECL作業溶液を使用して、膜を室温で数分間インキュベートします。インプリントされた膜をラップで包み、X線露光カセットに固定します。次に、暗室でX線フィルムを膜に押し付け、数秒から数時間露光します。現像および固定後、タンパク質または核酸のバンドがX線フィルムに明確に表示されます。

このキットには独自の発光基質システムがあり、露出バックグラウンドを低減すると同時に新しい酸化剤を導入することでキットの安定性が大幅に向上し、室温で最大 1 年間安定させることができます。X 線に加えて、蛍光 CCD スキャンも直接使用でき、主に WB 検出と化学発光免疫検出システムで使用できます。

特徴

高感度、高信号対雑音比で、中程度のピックグレードの抗原を検出できます。

素早く明るく光り、印刷されたフィルムバンドは蛍光灯の下で観察できます。

ターゲットの存在量が多い従来のタンパク質サンプルを検出するのに特に適しています。

新しい酸化剤。室温で最大 1 年間安定します。

アプリケーション

化学発光ELISA

ウエスタンブロット

ドットブロット-DNA/RNA

サザンブロットDNA

ノーザンブロットRNA

仕様

コンポーネント

配送と保管

製品は常温で出荷され、常温で1年間保存できます。長期間使用しない場合は、有効期間を延ばすために2 ℃ ～8 ℃で保存することをお勧めします。

注意: 36222-A は光を避けて保管してください。

説明書（X線フィルムなど）

1. 通常の電気泳動、転写膜、HRP 標識抗体または HRP 標識核酸プローブのインキュベーションおよび膜の洗浄。

注意: ECL 発光溶液は HRP の色素基質であるため、検出システムは HRP 酵素標識抗体または核酸プローブに基づく必要があります。

2. 膜を最後に洗浄すると同時に、発光作業溶液を新しく調製します (発光作業溶液 100～200 μL/cm2 膜)。試薬 A と試薬 B を同量取り、後で使用するためによく混ぜます。

注意: 試薬 A と試薬 B は、異なるチップを使用する必要があります。作業液はすぐに使用することをお勧めします。室温で数時間後でも使用できますが、感度はわずかに低下します。

3.平らなピンセットを使用して膜を取り出し、ろ紙の上に置いてローションを排出します。膜が完全に乾燥しないようにします。膜を発光作業溶液に完全に浸し、発光作業液と十分に接触させます。室温で1〜2分間インキュベートし、すぐに錠剤の露出の準備をします。

4. ピンセットで膜を拾い、ろ紙の上に置いて発光作動液を排出します。ただし、発光液を洗い流さないでください。

5. 膜より大きいサイズのラップをX線フィルムオブスキュラの内側の表面に置きます。印刷された膜をラップに取り付け、印刷された膜の周りにラップを完全に折り曲げ、ガス泡と折り目を取り除いて、余分なラップの端を切り取ります。フィルターペーパーを使用して余分な発光作動液を吸い取ります。印刷された膜を覆うラップをオブスキュラにテープで固定し、タンパク質バンドを上向きにします。

6. 暗室からX線フィルムを取り出し、ラップされた膜の上に置きます。フィルムをプレスして30秒～2分間露光します。その後、フィルムを現像して固定します。

注意: 露光時間は露光強度に応じて調整する必要があります。バックグラウンドが高すぎる場合は、2 枚の X 線フィルムを同時に使用します。

その他の露出方法

CCD 撮影を使用する場合: 膜を作動液に浸し、使用説明書に従って起動した後、膜を取り外して写真を撮影します。また、状況に応じて機械の測定パラメータを調整して、信号対雑音比を向上させることができます。

注記

1. 膜の転写、密封、インキュベーションの際には気泡が入らないように注意してください。また、手袋を着用すると膜に指紋が残らず、清潔に保つことができます。

2. 長時間の露出や過剰なタンパク質はバックグラウンドを濃くし、バンド強度の変化が直線関係を失います。露出不足はバンドをぼやけさせます。

3. 印刷された膜をラップで包むと、蛍光が消えてしまうことがあります。高品質のラップを選択してください。

4. 相互吸着や摩擦によりバックグラウンドが深くなる可能性があるため、同じ洗浄膜ボックスに複数の膜を配置しないでください。

5. フィルム上のバンドの位置とサイズは、可視染色済みタンパク質マーカーと蛍光オートラジオグラフィー露出タグを使用して正確に決定できます。

6. ビオチン-アビジン システムを使用し、ミルク クロージャーの使用は避けてください。ミルク クロージャーを使用すると、バックグラウンドが高くなりすぎる可能性があります。

7. 金属酸化物粒子により膜に粒状の斑点が現れる場合があります。錆びたハサミやピンセットの使用は避けてください。プラスチック製の平らなピンセットを使用してください。

8. アジ化ナトリウム (NaN3) は HRP の活性を阻害する可能性があるため、HRP 標識プローブまたは抗体の回収時には NaN3 の使用を避け、必要に応じて 0.01% 以下で使用してください。

9. この製品は、一般的な化学処理によれば特別な毒性はありません。

10. 健康と安全を確保するために、白衣や手袋などの必要な個人用保護具を着用してください。

11. 研究目的のみに使用してください。

ドキュメント:

安全データシート

36222-A-MSDS-CN20250110

36222-B-MSDS-CN20250110

マニュアル

36222_マニュアル_HB221212_EN

 引用と参考文献:

[1] He X、Li J、Zhou G、et al. 抑制性介在ニューロンのシナプス可塑性による海馬リズムと記憶のゲーティング。ニューロン。2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)

[ 2 ] Wang X、Zhang S、Jin D、et al. μ-オピオイド受容体作動薬はMOR/AKT/Slug経路を介して膀胱癌における循環腫瘍細胞の形成を促進する：ランダム化比較試験を含む包括的研究。Cancer Commun（ロンドン）。2023;43(3):365-386。doi:10.1002/cac2.12408（IF:16.2）

[ 3 ] Li Y、Zhou S、Song H、Yu T、Zheng X、Chu Q。KAE を組み込んだ CaCO3 ナノ粒子により、増幅カルシウム過負荷癌治療が可能に。Biomaterials。2021;277:121080。doi:10.1016/j.biomaterials.2021.121080(IF:12.479)

[ 4 ] Xu Z、Xu J、Sun S、et al。メケリオリドは肝細胞癌においてROS介在ERS駆動型免疫原性細胞死を誘発する。Redox Biol. 2022;54:102351. doi:10.1016/j.redox.2022.102351(IF:11.799)

[ 5 ] Cai Z、Zhang Y、Zhang W、et al. 赤血球中のヒ素の保持と過剰な赤血球貪食は、酸化還元恒常性の障害によるセレン濃度の低下と関連している。Redox Biol. 2022;52:102321. doi:10.1016/j.redox.2022.102321(IF:11.799)

[ 6 ] Kaushik AC、Wu Q、Lin L、et al。結核菌感染症のエクソソームncRNAプロファイリングにより、miRNA-185-5pが結核の新規バイオマーカーとして特定されました。Brief Bioinform。2021;22(6):bbab210。doi:10.1093/bib/bbab210(IF:11.622)

[ 7 ] Hu P、Li H、Sun W、et al。コレステロール関連リソソーム障害は造血悪性腫瘍の細胞死を引き起こす：LW-218の細胞毒性効果の動的解析。Acta Pharm Sin B。2021;11(10):3178-3192。doi:10.1016/j.apsb.2021.02.004(IF:11.614)

[ 8 ] Wang X、Ni J、You Y、et al。SNX10を介したLPS感知はカスパーゼ5依存性シグナル伝達カスケードを介して腸管バリア機能障害を引き起こす。EMBO J. 2021;40(24):e108080. doi:10.15252/embj.2021108080(IF:11.598)

[ 9 ] Jiang K、Chen H、Fang Y、et al。エクソソームANGPTL1はクッパー細胞の分泌パターンを制御し、MMP9誘導性血管漏出を阻害することで大腸癌の肝転移を軽減します。J Exp Clin Cancer Res. 2021;40(1):21。2021年1月7日発行。doi:10.1186/s13046-020-01816-3(IF:11.161)

[1 0 ] Zhang S、Yang Z、Bao W、et al。SNX10（ソーティングネキシン10）はSRCのオートファジー分解を制御することで大腸がんの発生と進行を阻害する。オートファジー。2020;16(4):735-749。doi:10.1080/15548627.2019.1632122(IF:11.059)

[1 1 ] Liu L、Liang L、Yang C、Zhou Y、Chen Y. Fusobacterium nucleatum の細胞外小胞は、RIPK1 を介した細胞死経路を標的として腸バリアを弱める。Gut Microbes. 2021;13(1):1-20. doi:10.1080/19490976.2021.1902718(IF:10.245)