天然プロテインAは黄色ブドウ球菌に含まれる細胞壁表面タンパク質で、G属またはC属連鎖球菌から単離されたプロテインGに類似しており、主に免疫グロブリン（Ig）のFc領域と相互作用してほとんどの哺乳類IgGに結合しますが、結合特異性が異なります。さまざまな抗体（モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体）の分離および精製に使用できます。プロテインAとプロテインGは、異なる免疫グロブリンサブクラスへの結合特性が異なります（詳細は付録1を参照）。
この製品は遺伝子組み換えプロテインAを使用しており、Ig親和性特性を維持するだけでなく、天然タンパク質自体の非主要結合ドメインを除去して非特異的結合を低減します。SuRi rProtein Aアガロース樹脂は、マトリックスとして高度に架橋されたアガロースゲル、リガンドとして改変されたアルカリ耐性組換えプロテインAであり、高い物理化学的安定性を備えています。この製品を使用すると、腹水、血清、培養培地サンプルからワンステップアフィニティークロマトグラフィーによって高純度の抗体が得られ、使いやすく、広く使用されています。

コンポーネント

仕様

配送 そして ストレージ

商品は保冷剤と一緒に発送され、2～8℃で5年間安定して保存できます。

説明書

1. バッファの準備

以下の緩衝液は、使用前に0.22μmまたは0.45μmのフィルター膜でろ過することをお勧めします。バランス/結合/洗浄緩衝液：0.15M NaCl、20mM Na2HPO4、pH7.0

溶出緩衝液: 0.1 Mグリシン、pH 3.0

中和緩衝液：1MTris-HCl、pH 8.5

2. サンプルの準備

血清サンプル、腹水、または細胞培養溶液を結合/洗浄バッファーで希釈するか、サンプルを結合/洗浄バッファーで透析して、カラムにロードする前にサンプル溶液のイオン強度と pH が適切であることを確認します。

3. カラムパッキング

気泡が発生しないように注意しながら、SuRi rProtein A アガロース樹脂を適切なクロマトグラフィーカラムにロードします。

4. サンプルの精製

1) バランス: クロマトグラフィーカラムは、カラム容量の 5 倍の結合バッファーでバランスが取られているため、パッキングはターゲット タンパク質と同じバッファー システムにあり、タンパク質を保護する役割を果たします。

2) サンプルのロード: サンプルはバランスの取れた rProtein A アガロース樹脂にロードされ、対象タンパク質と樹脂の完全な接触を確保し、対象タンパク質の回収率を向上させ、テストする流出物を収集します。

3) 洗浄：カラム容量の10～15倍の洗浄バッファーで洗浄し、特異的に吸着していない不純物タンパク質を除去し、洗浄液を回収します。

4) 溶出：カラム容量の5～10倍の溶出バッファーで溶出し、溶出液、つまり目的のタンパク質成分を収集します。

5) CIP洗浄と保存：通常、0.1-0.5 M NaOHを3CV以上使用し、接触時間は15分です。次に、5CVのバランス溶液で中性になるまで洗浄します。最後に、カラム容量の5倍の20％エタノールでバランスを取り、同じ容量の20％エタノールで4°Cで保存して、充填剤が細菌に汚染されるのを防ぎます。

5. SDS-PAGE検出

精製過程で得られたサンプル（元のサンプル、流出成分、洗浄および溶出成分などを含む）をSDS-PAGEで検出し、精製効果を判定しました。

注記

1. 製品を冷蔵しないでください。
2. rProteinAAgarose Resin は、アガロース樹脂が均一に混ざるように、使用前に数回完全に反転させる必要があります。
3. すべての操作中、サンプルは 4°C または氷上で操作する必要があります。
4. 安全と健康のため、操作時には白衣と使い捨て手袋を着用してください。
5. 研究目的のみにご使用ください。

添付表1：異なる免疫グロブリンに対するタンパク質AとGの結合能の概要 種

SuRi rプロテインAアガロース樹脂