非制限エンドヌクレアーゼ、広域スペクトルヌクレアーゼとしても知られる UltraNuclease は、Serratia Marcescen 由来の非特異的エンドヌクレアーゼで、核酸内の任意のヌクレオチド間の内部ホスホジエステル結合を加水分解して、長さ 2～5 塩基の 5'-モノリン酸オリゴヌクレオチドを生成します。非常に幅広い条件 (6 M 尿素、0.1 M グアニジン HCl、0.4% Triton X-100、0.1% SDS、1 mM EDTA、1 mM PMSF) で、さまざまな形式 (二本鎖、一本鎖、線状、環状、天然または変性) の DNA と RNA を分解することができ、生物学的製品から核酸を除去するために広く使用されています。UltraNuclease は、その後対応する方法で除去することもできます。

このキットは、二重抗体サンドイッチ酵素結合免疫吸着測定法（サンドイッチELISA）の原理を使用して、変性および非変性UltraNucleaseの残留物を検出します。まず、マイクロプレートを抗UltraNucleaseウサギポリクローナル抗体でコーティングして、固相抗体を形成します。次に、UltraNuclease標準および試験サンプルを固相抗体マイクロプレートに加え、次にビオチン標識抗UltraNucleaseポリクローナル抗体を加え、最後にホースラディッシュペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン（SA-HRP）を加えて、抗体+抗原+抗体-ビオチン+SA-HRP複合体を形成します。その後、複合体にTMB基質を加えて、複合体を洗浄した後の色の反応を観察します。TMBは、HRP酵素の触媒下で青色に変換され、最後に酸の存在下で黄色に変換され、色の濃淡はサンプル中のUltraNucleaseの量と正の相関関係にあります。

このキットの検出定量範囲は0.047～3 ng/mL、検出下限値は23.5 pg/mLです。

特徴

• 高感度: 製造過程および最終生物学的サンプル中のわずか 23 pg/ml の UltraNuclease 残留物を検出します。
• 精度を保証: UltraNuclease 残留物は 80% ～ 110% の回収率で正確に検出できます。
• 特異性: YEASEN UltraNuclease と連携して使用し、残留物を正確に検出できます。
• 安定性:ロット間の差は少なく、37℃以下で6日間使用してもキットの特性に影響はありません。
• 簡単な信号収集: ビオチン-ストレプトアビジン システムを使用すると、信号を安定して拡大できます。
• 完全なキット: すべての主要コンポーネントがキットに含まれており、コスト効率に優れています。

応用

• 生物学的製品中の残留ウルトラヌクレアーゼ試験

仕様

コンポーネント

配送と保管

UltraNuclease ELISA キットはアイスパックと一緒に出荷され、2°C ～ 8°C で保管できます。未開封の製品は 1 年間有効です。試薬を開封すると、半年有効です。この製品を絶対に冷凍しないでください。

調製した試薬の保管：

1. 希釈した洗浄緩衝液と希釈緩衝液は2℃～8℃で1週間保存できます。

2. 標準36701-Cは液体であり、2°C～8°Cで1年間保存されます。

3. 調製した検出抗体と停止バッファーは2℃～8℃で1ヶ月間保存できます。

数字

• 特異性の実証

図 1. UltraNuclease ELISA キットの特異性が上の図に示されています。

8つのミミックサンプルについて、キット内の抗体との非特異反応を推定しました。8つのサンプルと陰性サンプルの間に有意差はありませんでした。（*：陰性サンプルとの有意差あり；NS：陰性サンプルとの有意差なし）

• 高精度ディスプレイ

A)

B)

図 2. UCF.ME™ UltraNuclease ELISA の精度は上記のスキームに従って評価されました。

標準曲線上の各濃度で 6 回繰り返して試験したところ、すべての CV% は 5% 未満でした (図 2A)。3 人の分析者が UCF.ME™ UltraNuclease ELISA 実験を実施したところ、CV% は 15% 未満でした (図 2B)。

• 精度検証

A)

B)

図 3. UCF.ME™ UltraNuclease ELISA の精度は、次のスキームに従って評価されました。

UltraNuclease は、5 μg/mL 細胞溶解液 (HEK293、E.coli、CHO、および Vero) に個別に添加され、最終添加濃度は 1.5 ng/mL でした。さまざまな細胞サンプルの精度は、他のベンダーよりも優れていることが示されました (図 3A)。UltraNuclease は実際のサンプル (クライアントから提供) に添加され、3 ng/mL から 0.093 ng/mL まで 2 倍ずつ希釈されました。添加回収率はすべて 80% ～ 110% でした (図 3B)。