仕様

この製品は溶液の形で提供され、粉末を 0.9% NaCl で再構成して 10 mg/mL 溶液を作成し、その後 0.22 μm フィルターを使用して滅菌します。通常は 1:1000 ～ 1:2000 の割合で希釈して使用しますが、特定の希釈率は関連文献に記載されているように細胞の種類によって異なります。

配送と保管

輸送および保管は -20 ºC で行うこと、保存期間は 2 年とすることを推奨します。凍結融解を繰り返さないように、小分けにして保管することをお勧めします。

予防：

1. 安全と健康のため、実験着と使い捨て手袋を着用してください。

2. この製品は研究目的のみに使用されます。

操作手順

（参考までに、具体的な濃度は異なる場合がありますので、関連文献を参照してください）：

注意: ポリブレンは特定の細胞 (終末分化ニューロン、DC 細胞など) に対して著しい毒性を示す可能性があるため、初回使用時には毒性テストを行うことをお勧めします。

実験1: レトロウイルス感染

1. 組み換えレトロウイルスストックの調製: トランスフェクションレトロウイルスパッケージング細胞の単層を含む細胞を、5 mL の成長培地 (5% 血清) とともに 100 mm ディッシュで培養します。24 時間後、培養培地を除去し、0.45 μm フィルターでろ過します。

2. 感染用細胞の培養: 100 mm ディッシュに、ディッシュあたり 5× 10 ⁵の細胞密度で 10 mL の完全増殖培地を加えます。

3. ウイルス感染: 細胞培養24時間後、完全培養培地を除去します。ポリブレンを含むウイルス上清2mL（最終濃度：5～10μg/mL）を37℃で3～6時間細胞に感染させます。

4. ウイルス粒子の収集: 8 mL の完全増殖培地を追加します。2 ～ 3 日間培養した後、培養培地を収集してウイルス粒子を取得します。

実験2: トランスフェクション

1. 細胞密度が約 50% の完全増殖培地で細胞を培養します。

2. 18～24 時間の細胞培養後、DNA 成長培地とポリブレンの混合物を調製します。完全成長培地 (60 mm ディッシュの場合は 2 mL、100 mm ディッシュの場合は 3 mL) を加え、37°C​​ に予熱します。10 ng～10 µg のプラスミドを穏やかに混合します。ポリブレンを最終濃度 5～10 µg/mL になるように加え、穏やかに混合します。各成分は指定された順序で添加する必要があります。

3. 培養培地を取り除き、DNA-成長培地-ポリブレン溶液を細胞に加え、37°C​​で6〜20時間培養します。細胞培養の最初の6時間以内に、1.5時間ごとに穏やかに混合します。

4. DNA 成長培地ポリブレン溶液を取り除きます。細胞を DMSO ショック溶液 (1× HBSS 中の 15% DMSO) で覆います。均一に分散されるように、溶液を追加するたびに培養皿を 10 秒間軽く振ってください。細胞を 37°C で 4 分間インキュベートします。

5. すぐに DMSO ショック溶液を取り除き、細胞を完全増殖培地で 2 回優しく洗浄します。60 mm ディッシュの場合は 1 回につき 5 mL の培養培地で洗浄し、100 mm ディッシュの場合は 1 回につき 10 mL の培養培地で洗浄します。

6. 細胞に完全な成長培地を追加します。

7. タンパク質発現: 24 ～ 72 時間の培養後、必要に応じてタンパク質発現分析のために細胞を収集します。

細胞の選択: 24 ～ 72 時間の培養後、細胞の状態に応じて新鮮な選択培地に切り替え、細胞の選択を続けます。